Question

【題目】根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí)，回答下列問(wèn)題。

（1）質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：

為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)是____________。

（2）按其來(lái)源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類(lèi)，即_________和__________。

（3）若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用____________技術(shù)。

（4）基因工程中除質(zhì)粒外，____________和____________也可作為運(yùn)載體。

（5）若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是____________。

Answer 1

【答案】切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRI切割產(chǎn)生的相同 大腸桿菌DNA連接酶 T4DNA連接酶 PCR λ噬菌體衍生物 動(dòng)植物病毒 未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱

【解析】

1、限制酶具有專(zhuān)一性，其能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并能切斷特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵；一般情況下，切割目的基因和質(zhì)粒要用同一種限制酶，若兩種限制酶切割形成的黏性末端相同，也可以使用。

2、DNA連接酶能連接具有相同黏性末端的兩個(gè)DNA片段，根據(jù)酶的來(lái)源不同，可以將其分為兩類(lèi)：一類(lèi)是從大腸桿菌中分離得到的，稱為E·coli DNA連接酶；另一類(lèi)是從T4噬菌體中分離出來(lái)的，稱為T(mén)4DNA連接酶。

（1）為使運(yùn)載體與目的基因相連，不同的限制酶應(yīng)切割出相同的黏性末端，故使用的酶應(yīng)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRI切割產(chǎn)生的相同。

（2）根據(jù)酶的來(lái)源不同，可以將DNA連接酶分為兩類(lèi)：E·coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。

（3）反轉(zhuǎn)錄是以RNA為模版來(lái)合成DNA的過(guò)程�？梢栽隗w外短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增DNA的技術(shù)叫PCR技術(shù)（多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）。

（4）基因工程中常用的運(yùn)載體有質(zhì)粒、動(dòng)植物病毒和λ噬菌體的衍生物。

（5）大腸桿菌細(xì)胞外有細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，能阻止其他物質(zhì)的進(jìn)入，吸收質(zhì)粒（外源DNA）的能力極弱，只能通過(guò)Ca2+處理細(xì)胞，使細(xì)胞處于能吸收周?chē)�環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。