圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列,圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列.現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶,酶切位點分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG.請回答下列問題:
(1)圖1中目的基因D的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個脫氧核苷酸之間是通過
連接的,它是DNA復(fù)制時由
催化形成的.
(2)若用限制酶MboⅠ完全切割圖1中DNA片段,則產(chǎn)物中至少有
種不同DNA片段;若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換,再用限制酶SmaⅠ完全切割,其產(chǎn)物長度分別為
.
(3)為了提高實驗成功率,需要獲取大量目的基因D,可通過
技術(shù)對圖1DNA分子進(jìn)行擴增.
(4)若用同種限制酶處理圖1、2中兩種分子,以便構(gòu)建重組質(zhì)粒,最好選用的限制酶是
.
(5)在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后,為了篩選出含質(zhì)粒的大腸桿菌,一般先用添加含有抗生素
的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),然后再用影印法接種到含有抗生素
的培養(yǎng)基中培養(yǎng),即可篩選出含重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞.