Question

【題目】2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家。綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。下圖為我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：

（1）以上培育過(guò)程中應(yīng)用到的生物技術(shù)有 。（任選兩個(gè)）

（2）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是： （用數(shù)字表示）。

①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白。

（3）使用培養(yǎng)基進(jìn)行胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常要加入 等天然成分。

（4）圖中通過(guò)過(guò)程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)。①請(qǐng)畫(huà)出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端 。在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能連接起來(lái)，理由是： 。

Answer 1

【答案】（1） 基因工程、核移植、早期胚胎培養(yǎng)、 胚胎移植任選兩個(gè)

（2）②①③④ （3）血清

（4）------G GATCC-----------

------ CCTAG 或 G-------

兩個(gè)不同的限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)（答“相同且互補(bǔ)”也給分）

【解析】（1）以上培育過(guò)程中應(yīng)用到的生物技術(shù)有基因工程、核移植、早期胚胎培養(yǎng)、 胚胎移植（2）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是：②①③④

①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白。

（3）使用培養(yǎng)基進(jìn)行胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常要加入血清等天然成分。

（4）圖中通過(guò)過(guò)程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒。限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)。那么質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為

------G GATCC-----------

------ CCTAG 或 G-------

在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能連接起來(lái)，理由是兩個(gè)不同的限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)