Question

【題目】2011年中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)獲得了表達(dá)TLR4基因的抗病綿羊，這種轉(zhuǎn)基因綿羊加大了對(duì)病原體的清除能力。如圖為該TLR4轉(zhuǎn)基因克隆羊的培育過(guò)程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）②過(guò)程中是將重組質(zhì)粒而不是將目的基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞的原因是_________。促進(jìn)重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞與質(zhì)粒上的______基因有關(guān)。羊胚胎成纖維細(xì)胞是否已經(jīng)導(dǎo)入目的基因的篩選方法有______（答出兩點(diǎn)）。

（2）羊胎兒成纖維細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，數(shù)量不斷增多，往往會(huì)發(fā)生______現(xiàn)象，此時(shí)，需要用胰蛋白酶消化組織中的______和細(xì)胞外的其他成分，獲得單個(gè)的成纖維細(xì)胞懸浮液。

（3）③過(guò)程中需要對(duì)羊胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行______的特殊處理，再取出細(xì)胞核，這有利于細(xì)胞核的一系列變化和細(xì)胞融合后______的啟動(dòng)。

Answer 1

【答案】因?yàn)橹苯訉?dǎo)入，目的基因無(wú)法在受體細(xì)胞中復(fù)制增殖和穩(wěn)定存在 控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的 根據(jù)標(biāo)記基因篩選、DNA雜交技術(shù)篩選 接觸抑制 膠原纖維 營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的牛血清濃度） 基因表達(dá)的分子開(kāi)關(guān)

【解析】

1.基因表達(dá)載體的構(gòu)建是實(shí)施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。

2.目的基因的檢測(cè)與鑒定的方法：檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，用DNA分子雜交技術(shù)；檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，用分子雜交技術(shù)；檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，用抗原-抗體雜交技術(shù)。

3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，數(shù)量不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱(chēng)為細(xì)胞的接觸抑制。貼滿(mǎn)瓶壁的細(xì)胞需要用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細(xì)胞繼續(xù)增殖。

（1）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞時(shí)，必須先構(gòu)建基因表達(dá)載體，因?yàn)橹苯訉?dǎo)入受體細(xì)胞，目的基因無(wú)法在受體細(xì)胞中復(fù)制增殖和穩(wěn)定存在，不能傳給下一代；促進(jìn)重組質(zhì)粒進(jìn)入受體細(xì)胞與質(zhì)粒上的控制質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)移的基因有關(guān)，該基因能將插入的目的基因序列轉(zhuǎn)移并整合到生物的染色體上；檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞羊胚胎成纖維細(xì)胞時(shí)，可根據(jù)質(zhì)粒上的抗生素抗性標(biāo)記進(jìn)行篩選，也可用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行篩選，將單鏈的目的基因片段用放射性同位素標(biāo)記，進(jìn)行DNA分子雜交。

（2）在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，數(shù)量不斷增多，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，往往會(huì)發(fā)生接觸抑制現(xiàn)象；故需要用胰蛋白酶消化組織細(xì)胞中的膠原纖維和細(xì)胞外的其他成分，獲得單個(gè)的成纖維細(xì)胞懸浮液。

（3）③過(guò)程表示取出供體細(xì)胞核，進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞核移植，需要對(duì)羊胚胎成纖維細(xì)胞進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)限制性培養(yǎng)（或調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的牛血清濃度）的特殊處理，再取出細(xì)胞核，這有利于細(xì)胞核內(nèi)基因的選擇性表達(dá)，即有利于細(xì)胞核的一系列變化和細(xì)胞融合后基因表達(dá)的分子開(kāi)關(guān)的啟動(dòng)。