Question

【題目】CTAB法是一種提取植物DNA的方法。CTAB是一種陽離子去污劑，能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽（>0.7mol/LNaCl）濃度下可溶，在低鹽（0.1-0.5mol/LNaCl）濃度下，復(fù)合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白質(zhì)及多糖等仍溶解于溶液中。通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)后，加入異丙醇獲得的沉淀物為CTAB與核酸復(fù)合物，用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗滌可去除CTAB。請(qǐng)回答下列問題：

（1）CTAB提取液中，NaCl濃度為1.4mol/L的目的是_________。步驟4中用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗滌沉淀物的目的是去除_________。

（2）蘋果組織研磨前經(jīng)液氮冷凍處理，更易于研磨的原因是_________。

（3）用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗滌后的沉淀物中含有RNA，為得到較為純凈的DNA，可先用_________溶液溶解，然后加入_________酶，然后再重復(fù)步驟_________，最后在上清液中加入一定體積的、冷卻的_________，可以得到純凈的DNA。

Answer 1

【答案】溶解CTAB與核酸復(fù)合物 CTAB 冷凍后的細(xì)胞易破碎 2mol/L的NaCl RNA ② 體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇

【解析】

DNA粗提取和鑒定的原理：

1、DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性。

2、DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會(huì)被染成藍(lán)色。

DNA粗提取實(shí)驗(yàn)材料的選擇的原則為：材料易取，DNA含量高，一般動(dòng)物材料中選擇雞血，植物材料中選擇獼猴桃。

（1）根據(jù)題干信息“CTAB能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽（>0.7mol/LNaCl）濃度下可溶”所以NaCl濃度為1.4mol/L的目的是溶解CTAB與核酸復(fù)合物；題干中的信息“用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗滌可去除CTAB”，所以步驟4中用體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇洗滌沉淀物的目的是去除CTAB。

（2）由于冷凍后的細(xì)胞易破碎，所以需要將蘋果組織研磨前經(jīng)液氮冷凍處理。

（3）由于DNA在2mol/L的NaCl溶液中溶解度較大，所以為了得到較為純凈的DNA可以先用2mol/L的NaCl溶液溶解，加入RNA酶，將RNA水解，重復(fù)步驟②，由于DNA分子不溶于酒精，而細(xì)胞中的其他蛋白質(zhì)溶于酒精，所以可以加入加入一定體積的、冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇，得到純凈的DNA。