Question

【題目】凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質量的大小分離蛋白質的有效方法。科研人員在實驗室中利用初步獲得的豬紅細胞液體進行血紅蛋白（相對分子質量約為64000）的提取、分離和鑒定實驗，請回答下列問題：

（1）將初步獲得的紅細胞洗滌好后加入____________，經攪拌、離心、分層后分出血紅蛋白溶液，再裝入____________中12小時，即完成粗分離。

（2）粗分離的血紅蛋白溶液中含有一些微蛋白（相對分子質量約為11800），這兩種蛋白質通過凝膠時，____________（填“血紅蛋白”或“微蛋白”）移動速度較快，原因是_____________________。

（3）在純化洗脫血紅蛋白時，需要加入____________（填“磷酸緩沖液”或“生理鹽水”），理由是________________________。

（4）為鑒定血紅蛋白的純度，要利用電泳實現(xiàn)樣品中各種分子的分離，常用的兩種電泳方法是____________。

Answer 1

【答案】蒸餾水和甲苯 透析袋 血紅蛋白 血紅蛋白相對分子質量較大，無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動， 路程較短，因此移動速度較快 磷酸緩沖液 保持體外溶液的pH與體內環(huán)境中的pH基本-致，維持蛋白質正常結構和功能（或讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內，維持其正常結構和功能） 瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過洗滌紅細胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經過透析去除分子量較小的雜質，即樣品的粗分離；然后通過凝膠色譜法將相對分子質量大的雜質蛋白除去，即樣品的純化；最后經聚丙烯酰胺凝膠電泳進行純度鑒定。

（1）血紅蛋白樣品處理及粗分離時，為了釋放血紅蛋白需要加入蒸餾水和40%甲苯，細胞破裂釋放血紅蛋白，然后離心分層出血紅蛋白溶液，最后進行透析。

（2）凝膠實際上是一些微小的多孔球體，相對分子量較小的蛋白質容易進入凝膠內部的通道，路程較長，移動速度較慢；相對分子量較大的蛋白質無法進入凝膠內部通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快。比較分子量，血紅蛋白分子量大于微蛋白，所以血紅蛋白移動速度較快。

（3）洗脫時需要加入磷酸緩沖液，主要是保持體外溶液的pH與體內環(huán)境中的pH基本一致，讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內，維持其正常結構和功能。

（4）為鑒定血紅蛋白的純度，要利用電泳實現(xiàn)樣品中各種分子的分離，常用的兩種電泳方法是：瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳。