Question

【題目】高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選了高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請分析回答下列問題：

（1）按功能分，Ⅰ號培養(yǎng)基稱為______；該培養(yǎng)基中必須以______作為唯一碳源。過程①②合稱為______，若該過程所得平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細菌數(shù)約為______個。

（2）對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，目的是______。

（3）在1號培養(yǎng)基上挑出能產生淀粉酶的嗜熱菌菌落的鑒別方法是培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的______；也可將得到的菌懸液轉接于同時含有葡萄糖和淀粉作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，看到如下圖所示情況，可判斷圖中______的菌落含有所需菌種。

（4）如果高溫淀粉酶的產業(yè)化需要其活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應選擇下圖中的______（填寫字母）固定化工藝。

Answer 1

【答案】選擇培養(yǎng)基 淀粉 稀釋涂布平板法 2.5×107 使培養(yǎng)基中所有微生物永遠喪失生長繁殖能力（或殺死培養(yǎng)基中所有的微生物，包括芽孢和孢子或防止雜菌污染） 透明圈 周圍不顯藍色 C

【解析】

本實驗目的是從熱泉中篩選了高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，因此需要制備以淀粉為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；圖示可見，①過程是稀釋嗜熱菌培養(yǎng)液的過程，接種嗜熱菌即②過程常用稀釋涂布平板法。培養(yǎng)基配制和滅菌過程中，應注意先調節(jié)pH，后滅菌，一般培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法，高壓蒸汽滅菌法是可殺滅包括芽胞在內的所有微生物的一種滅菌方法。部分嗜熱菌在Ⅰ培養(yǎng)基上生長時可產生淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉后會在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說明產生的淀粉酶越多，因此應挑選透明圈大的菌落接種在Ⅱ號培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（1）Ⅰ號培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中必須以淀粉作為唯一碳源。過程①②為稀釋涂布平板法；若平板上的平均菌落數(shù)為50個，所用稀釋液的體積為0.2mL，稀釋倍數(shù)為105時，則每毫升樣品中的細菌數(shù)約為50÷0.2×105=2.5×107個。

（2）對配制的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽滅菌，是為了殺滅包括芽胞在內的所有微生物，防止雜菌污染。

（3）1號培養(yǎng)基上的嗜熱菌可產生淀粉酶分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈；若菌落含有可產淀粉酶的嗜熱菌，淀粉會被分解，加碘液后不顯藍色，因此可判斷圖中周圍不顯藍色的菌落含有所需菌種。

（4）據(jù)圖分析，A是物理吸附法，B是化學結合法，C是包埋法，由于酶容易從包埋材料中漏出，所以一般不使用包埋法，化學結合法可能會對酶活性產生影響，想要酶活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩(wěn)定的酶活性，則應選擇圖中的C。