Question

【題目】酸菜是經(jīng)乳酸菌發(fā)酵而成的一種發(fā)酵食品，制作過程中極易積累亞硝酸鹽。一些乳酸菌能合成亞硝酸鹽還原酶，能夠顯著降低亞硝酸鹽含量。請回答相關問題。

（1）為獲得高產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶的乳酸菌，某研究組以東北傳統(tǒng)自然發(fā)酵酸菜為材料進行分離。

①在進行乳酸菌分離純化時，科研人員將酸菜發(fā)酵液稀釋后涂布在含溴甲酚綠（遇酸變色）的__________（“選擇”或“鑒別”）培養(yǎng)基上，___________（“需氧”或“厭氧”）培養(yǎng)一段時間后，挑取周圍變色的_________臨時保存。

②在進行高產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶菌株篩選時，將臨時保存的各菌種分別接種到含______的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間，離心收集上清液，在________酸化條件下，依次加入等量對氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽進行反應，篩選反應顯色較_____（填“深” 或“ 淺”）的組對應的菌株。

（2）利用篩選得到高產(chǎn)煙硝酸鹽還原酶的某菌種進行酸菜腌制，測定亞硝酸鹽含量（單位：mg/kg），結(jié)果如下表所示：

據(jù)表分析，亞硝酸鹽含量最高時的腌制條件是________________________。為避免細菌大量繁殖，產(chǎn)生大量的亞硝酸鹽，除控制好表中涉及的腌制條件外，還需控制好腌制的__________。

Answer 1

【答案】鑒別 厭氧 （單個）菌落 亞硝酸鹽（或NaNO2） 鹽酸 淺 食鹽用量5%，腌制7天 溫度

【解析】

1、培養(yǎng)基按功能分：

種類	制備方法	特征	用途
選擇培養(yǎng)基	培養(yǎng)基中加入某種化學成分	根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率	加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌
鑒別培養(yǎng)基	加入某種試劑或化學藥品	依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應，產(chǎn)生明顯的特征變化而設計	鑒別和區(qū)分菌落相似的微生物，如伊紅和美藍培養(yǎng)基可以鑒別大腸桿菌

2、泡菜的制作及亞硝酸鹽含量的測定：
（1）泡菜的制作原理：泡菜的制作離不開乳酸菌；在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。
（2）測定亞硝酸鹽含量的原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料；將顯色反應后的樣品與已知濃度的標準液進行目測對比，可以大致估算出亞硝酸鹽的含量。

（1）①溴甲酚綠遇酸變色，此結(jié)論可用于鑒定乳酸菌，且乳酸菌是厭氧菌，因此在進行乳酸菌分離純化時，將酸菜發(fā)酵液稀釋后涂布在含的鑒別培養(yǎng)基上；厭氧培養(yǎng)一段時間后，挑取周圍變色的（單個）菌落進行臨時保存。
②在進行高產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶菌株篩選時，將臨時保存的各菌種分別接種到含亞硝酸鹽（或NaNO2）的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間，離心收集上清液；在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料。顏色越淺，說明亞硝酸鹽（或NaNO2）的含量越低，說明相應的菌株產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶的量越多，即要篩選反應顯色較淺的菌株。
（2）根據(jù)表中數(shù)據(jù)可知，亞硝酸鹽含量最高時的腌制條件是食鹽用量5％，腌制7天，亞硝酸鹽含量會達到最高；為避免細菌大量繁殖，產(chǎn)生大量的亞硝酸鹽，除控制好表中涉及的腌制條件外，還需控制好腌制的溫度，合適的溫度會對細菌的繁殖有幫助。