Question

2．繼哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進(jìn)展．最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成入的生長激素并分泌到尿液中．請回答：
（1）獲得轉(zhuǎn)基因小鼠的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
（2）將人的生長激素基因?qū)�入小鼠受體細(xì)胞，常用的方法是顯微注射．常用的受體細(xì)胞是受精卵，原因是受精卵具有全能性．
（3）通常采用DNA分子雜交技術(shù)檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．

Answer 1

分析 1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運(yùn)載體．其中常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動植物病毒．作為運(yùn)載體必須具備的條件：①要具有限制酶的切割位點(diǎn)； ②要有標(biāo)記基因（如抗性基因），以便于重組后重組子的篩選③能在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制；④是安全的，對受體細(xì)胞無害，而且要易從供體細(xì)胞分離出來．
2、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測與鑒定．

解答 解：（1）獲得轉(zhuǎn)基因小鼠的核心步驟是構(gòu)建基因表達(dá)載體，此過程需要用同一種限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，使它們露出相同的末端，再用DNA連接酶連接目的基因和運(yùn)載體．
（2）顯微注射法是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞最有效的方法．由于受精卵（或早期胚胎細(xì)胞）具有全能性，可使外源基因在相應(yīng)組織細(xì)胞表達(dá)，因此進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入受精卵（或早期胚胎）中．
（3）檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組通常采用DNA分子雜交技術(shù)．
（4）在研制膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)在目的基因前加入膀胱組織特異性表達(dá)的啟動子，使外源基因在小鼠的膀胱上皮細(xì)胞中特異表達(dá)．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（2）顯微注射   受精卵   受精卵具有全能性
（3）DNA分子雜交
（4）膀胱上皮

點(diǎn)評 本題綜合考查基因工程技術(shù)的有關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、使用工具、操作步驟及應(yīng)用，難度適中．