Question

【題目】回答下列“蛋白質(zhì)提取與分離實(shí)驗(yàn)”的有關(guān)問(wèn)題：

（1）為了提取和分離血紅蛋白，首先對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌以去除雜質(zhì)蛋白，洗滌時(shí)應(yīng)使用生理鹽水而不使用蒸餾水的原因是___________。

（2）血紅蛋白粗分離階段，采用圖1的透析裝置，透析的目的是___________，透析液選用的是___________，一段時(shí)間后，若向燒杯中加入雙縮脲試劑，透析袋內(nèi)溶液是否出現(xiàn)紫色并說(shuō)明判斷的依據(jù)：___________。

（3）圖2是利用電泳法分離蛋白質(zhì)的結(jié)果，電泳利用了待分離樣品中各種分子的___________等的差異，而產(chǎn)生不同遷移速度，實(shí)現(xiàn)各種分子的分離。

（4）圖3是用于分離蛋白質(zhì)的凝膠色譜柱，裝填凝膠色譜柱時(shí)，若發(fā)現(xiàn)有氣泡，則需___________。a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從凝膠色譜柱中洗脫出來(lái)的是a，是因?yàn)?/span>a蛋白質(zhì)分子___________。

Answer 1

【答案】防止紅細(xì)胞吸水漲破（或維持細(xì)胞形態(tài)） 除去小分子雜質(zhì) 磷酸緩沖液 是（或出現(xiàn)紫色），雙縮脲試劑可以透過(guò)半透膜，與袋內(nèi)可溶性蛋白反應(yīng)，生成紫色物質(zhì) 帶電性質(zhì)以及分子大小、形狀 重新裝填 相對(duì)分子質(zhì)量大，無(wú)法進(jìn)人凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快

【解析】

血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。

（1）提取和分離血紅蛋白的操作中，紅細(xì)胞的洗滌需要用生理鹽水，生理鹽水是紅細(xì)胞的等滲溶液，紅細(xì)胞不會(huì)變形，如果用蒸餾水紅細(xì)胞會(huì)通過(guò)滲透作用吸水漲破。

（2）除去小分子雜質(zhì)的方法是透析，小分子物質(zhì)可以透過(guò)透性袋進(jìn)入燒杯而大分子血紅蛋白保留在透性袋內(nèi)，透析液是（磷酸）緩沖液；由于透性袋是半透膜，雙縮脲試劑可以透過(guò)半透膜，與袋內(nèi)血紅蛋白質(zhì)反應(yīng)，生成紫色物質(zhì)，因此袋內(nèi)會(huì)出現(xiàn)紫色。

（3）由于各種分子帶電性質(zhì)以及分子大小、形狀等的差異，在電泳過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)各種分子的分離。

（4）裝填色譜柱時(shí)，如果有氣泡，需要重新裝填；凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，而a蛋白分子相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快，先洗脫出來(lái)。