Question

【題目】回答下列(一)(二)小題：

(一)請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細(xì)菌和脲酶固定化實(shí)驗(yàn)的有關(guān)問題：

(1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。

(2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用______滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因?yàn)镚6玻璃砂漏斗__________________，故用于過濾細(xì)菌。然后將尿素溶液加入到已經(jīng)滅菌的含有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。

(3)取適量含產(chǎn)脲酶細(xì)菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是____(A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　B．10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。

在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌菌落周圍出現(xiàn)______，其原因是細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生______所致。

(4)制備固定化脲酶時(shí)，用石英砂吸附脲酶，裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________________________________________________________________________。

(二)某小組欲進(jìn)行煙草原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)的研究。請回答：

(1)原生質(zhì)體的分離：在無菌條件下，取煙草無菌苗的葉片，放入含有0.5 mol/L甘露醇(維持較高滲透壓)的________混合液處理，經(jīng)過離心純化后獲得原生質(zhì)體。

(2)原生質(zhì)體的培養(yǎng)：將原生質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)，重新長出細(xì)胞壁，形成胚性細(xì)胞。此時(shí)，應(yīng)該________培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，然后經(jīng)兩條途徑形成再生植株。途徑一：細(xì)胞團(tuán)經(jīng)球形胚、______和胚狀體，最后發(fā)育成植株。途徑二：細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織，然后在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出芽，切割芽經(jīng)過生根后形成完整植株。上述發(fā)芽培養(yǎng)基中含量相對較高的激素是________，胚性細(xì)胞的主要特點(diǎn)是：________(A.液泡小、細(xì)胞核小　B．液泡大，細(xì)胞核大　C．液泡大，細(xì)胞核小　D．液泡小、細(xì)胞核大)。

(3)為了對煙草的某些性狀進(jìn)行改良，分離得到兩種煙草的原生質(zhì)體后，通過________________方法將它們的遺傳物質(zhì)組合在一起，經(jīng)培養(yǎng)獲得具有新性狀的再生植株。提取再生植株的DNA，采用______________擴(kuò)增相關(guān)基因，來鑒定遺傳物質(zhì)是否成功重組。

Answer 1

【答案】 瓊脂(糖) 高壓蒸汽 孔徑小，細(xì)菌不能濾過 A 紅色環(huán) 氨(或NH3) 除去游離的脲酶 果膠酶、纖維素酶 降低 心形胚 細(xì)胞分裂素 D 原生質(zhì)體融合 PCR方法

【解析】試題分析：本題考查微生物的分離、酶的固定化、原生質(zhì)體的分離與培養(yǎng)，考查對產(chǎn)脲酶細(xì)菌分離、酶固定化、原生質(zhì)體制備與培養(yǎng)原理與操作流程的理解與識記。

(一) (1)制備固體培養(yǎng)基需入加瓊脂(糖)。

(2)玻璃容器可采用高壓蒸汽法滅菌。G6玻璃砂漏斗孔徑小，細(xì)菌不能濾過，故用于過濾細(xì)菌。

(3)土壤稀釋液的稀釋倍數(shù)越大，培養(yǎng)基中菌落數(shù)越少；尿素固體培養(yǎng)基上僅產(chǎn)脲酶細(xì)菌可大量繁殖，其他細(xì)菌不能繁殖，故10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基上菌落數(shù)最少。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細(xì)菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生氨(或NH3)，使pH升高，酚紅試劑變紅，使菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)。

(4)用蒸餾水洗滌固定化酶柱，目的是除去游離的脲酶。

(二) (1)細(xì)胞壁的成分為纖維素和果膠，利用酶的專一性，用果膠酶、纖維素酶混合液處理，可除去細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體。

(2)將原生質(zhì)體培養(yǎng)形成胚性細(xì)胞后，應(yīng)該降低培養(yǎng)基中甘露醇濃度，以利于胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)。細(xì)胞團(tuán)可以經(jīng)球形胚、心形胚和胚狀體，最后發(fā)育成植株。發(fā)芽培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量相對較高；胚性細(xì)胞液泡小、細(xì)胞核大。

(3)得到兩種煙草的原生質(zhì)體后，可通過原生質(zhì)體融合方法將它們的遺傳物質(zhì)組合在一起。擴(kuò)增相關(guān)基因可采用PCR方法。