Question

【題目】電影中，“蜘蛛俠”能產(chǎn)生高強(qiáng)度的蜘蛛絲，現(xiàn)實(shí)中的基因工程也創(chuàng)造出了“蜘蛛羊”，該羊的乳汁中含有蛛絲蛋白，高強(qiáng)度的蛛絲蛋白可用于許多重要的特種工業(yè)領(lǐng)域．請回答：

（1）為保證實(shí)驗(yàn)成功，產(chǎn)生蛛絲蛋白的基因最好從 文庫中獲�。�若要獲得大量的目的基因片段，可采用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增過程需使用 酶．

（2）在構(gòu)建含蛛絲蛋白基因表達(dá)載體時，需使用的工具酶有限制酶和DNA連接酶，目的基因應(yīng)與 基因的啟動子等調(diào)控組件組合在一起，啟動子是 識別和結(jié)合的位點(diǎn)；構(gòu)建完成的基因表達(dá)載體需通過顯微注射技術(shù)導(dǎo)入羊的 ，獲得重組細(xì)胞．

（3）若所得到的“蜘蛛羊”乳汁中沒有檢測到蛛絲蛋白，應(yīng)先采用 技術(shù)檢測“蜘蛛羊”乳腺細(xì)胞中是否含有 ；若已確認(rèn)此步成功，則應(yīng)該繼續(xù)檢測是否 ．

Answer 1

【答案】（1）cDNA 熱穩(wěn)定DNA聚合（Taq）

（2）羊的乳腺蛋白 RNA聚合酶 受精卵

（3）DNA分子雜交 蛛絲蛋白基因（目的基因） 轉(zhuǎn)錄出了蛛絲蛋白的mRNA

【解析】

試題分析：1、cDNA文庫和基因文庫的比較表：

文庫類型	cDNA	基因組文庫
文庫大小	小	大
基因中啟動子	無	有
基因中內(nèi)含子	無	有
基因多少	某種生物的部分基因	某種生物的全部基因
物種間的基因交流	可以	部分基因可以

2、分子水平上的檢測：

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA﹣﹣分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)﹣﹣抗原﹣抗體雜交技術(shù)．

解：（1）cDNA文庫是利用mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得的，除去了基因結(jié)構(gòu)中內(nèi)含子的干擾，實(shí)驗(yàn)容易成功．PCR是體外擴(kuò)增DNA分子技術(shù)，且該技術(shù)是在較高溫度環(huán)境中進(jìn)行的，因此需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．

（2）為讓目的基因在羊的乳汁中表達(dá)，應(yīng)在目的基因前加上羊的乳腺蛋白基因的啟動子，構(gòu)建成表達(dá)載體；基因表達(dá)載體中的啟動子是RNA聚合酶結(jié)合的位點(diǎn)；基因表達(dá)載體常用顯微注射法導(dǎo)入受精卵，獲得重組細(xì)胞．

（3）表達(dá)載體已進(jìn)入細(xì)胞，但乳汁中沒有檢測到蛛絲蛋白，可能是蛛絲蛋白基因沒有導(dǎo)入受體細(xì)胞，也可能是蛛絲蛋白沒有表達(dá)，因此可先采用DNA分子雜交技術(shù)檢測蛛絲蛋白基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞，若已確認(rèn)此步成功，則應(yīng)該繼續(xù)采用分子雜交技術(shù)檢測蛛絲蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄形成mRNA，以找出原因．

故答案為：（1）cDNA 熱穩(wěn)定DNA聚合（Taq）

（2）羊的乳腺蛋白 RNA聚合酶 受精卵

（3）DNA分子雜交 蛛絲蛋白基因（目的基因） 轉(zhuǎn)錄出了蛛絲蛋白的mRNA