Question

2．人外周血單核細胞能合成白介素2 （Ⅱ-2），該蛋白可增強機體免疫功能，但在體內(nèi)易被降解D研究人員將Ⅱ-2基因與人血清白蛋白（HSA）基因拼接成一個融合基因，并在酵母菌中表達，獲得具有Ⅱ-2生理功能、且不易降解的Ⅱ-2-HSA融合蛋白．其技術(shù)流程如圖．請回答：
（1）培養(yǎng)人外周血單核細胞時，需要將溫度控制在37⁰C，此外還需要通入O₂和CO₂ （氣體）；圖中②表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）構(gòu)建基因表達載體時能夠催化磷酸二酯鍵斷裂的工具酶是限制酶；構(gòu)建好的基因表達載體必須具備啟動子、目的基因、終止子、標記基因等結(jié)構(gòu)，才能在宿主細胞內(nèi)表達．
（3）基因表達載體1中的位點a應(yīng)為限制酶BglⅡ的識別位點，才能成功構(gòu)建表達載體2．
（4）基因表達載體2導(dǎo)人酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL一2對應(yīng)的堿基序列不能含有終止（填“起始”或“終止”）密碼子，才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）應(yīng)用抗原-抗體雜交技術(shù)可檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①表示轉(zhuǎn)錄提取信使RNA，②表示逆轉(zhuǎn)錄形成目的基因，③表示基因表達載體的構(gòu)建．
限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因．
胚胎移植中受體的子宮不對外來胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為胚胎在受體內(nèi)的存活提供了可能．對囊胚階段的胚胎進行分割時要注意將內(nèi)細胞團均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進一步發(fā)育．

解答 解：（1）動物細胞培養(yǎng)所需要的條件是：95%空氣和5%CO₂氣體環(huán)境、適宜溫度（37℃）和pH、無毒無菌的環(huán)境及合適的營養(yǎng)成分，其培養(yǎng)基中通常需加入血清、血漿等一些天然成分；圖中②mRNA→cDNA，表示逆轉(zhuǎn)錄過程．
（2）構(gòu)建基因表達載體時先用限制酶切割讓質(zhì)粒和目的基因的磷酸二酯鍵獲得相同的黏性末端，然后在DNA連接酶的作用下重新組合：基因表達載體必須具備啟動子、目的基因、終止子和標記基因等結(jié)構(gòu)．
（3）根據(jù)目的基因IL-2cDNA的兩端的酶切位點分別是EcoRⅠ和BglⅡ，所以表達載體1也必須有這兩個酶切位點，表達載體1上已有EcoRⅠ，推測位點a應(yīng)含有BglⅡ．
（4）基因表達載體2導(dǎo)人酵母菌后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA中，與IL一2對應(yīng)的堿基序列不能含有終止密碼子，才能成功表達出IL-2-HSA融合蛋白．
（5）檢測酵母菌是否表達出IL-2-HSA融合蛋白可用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）37    O₂和CO₂   逆轉(zhuǎn)錄
（2）限制酶    終止子、標記基因
（3）a
（4）終止
（5）抗原-抗體

點評 本題結(jié)合流程圖，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記動物細胞培養(yǎng)的條件；識記基因表達載體的組成；明確啟動子和終止子的功能；識記目的基因分子水平檢測的方法等．