Question

【題目】如圖是獲得藥用乳腺生物反應(yīng)器轉(zhuǎn)基因小鼠的流程圖。回答下列問(wèn)題：

(1)圖中在Ⅰ過(guò)程前提取mRNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是___。

通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，兩個(gè)引物是___的結(jié)合位點(diǎn)，也是子鏈延伸的起點(diǎn)。

(2)圖中Ⅱ過(guò)程在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，有時(shí)需要使用兩種限制酶切割目的基因所在的片段，同時(shí)也用這兩種限制酶切割質(zhì)粒，這樣做的優(yōu)點(diǎn)是___。

(3)圖中Ⅲ過(guò)程獲得的小鼠Es細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)，Es細(xì)胞表現(xiàn)為__的特點(diǎn)。Ⅳ過(guò)程中要將含外源基因的Es細(xì)胞導(dǎo)入囊胚的，然后進(jìn)行胚胎移植。若要一次獲得多只相同性狀的后代，胚胎移植前應(yīng)采用___技術(shù)，通常選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或進(jìn)行操作。

(4)若獲得的已整合藥用蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠分泌的乳汁中檢測(cè)不到藥用蛋白，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是__。

Answer 1

【答案】防止RNA被RNA酶水解 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Tag酶） 避免目的基因及質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接 只分裂而不發(fā)生分化 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 胚胎分割 桑椹胚 藥用蛋白基因沒(méi)有轉(zhuǎn)錄或翻譯

【解析】

胚胎移植的基本程序主要包括：

①對(duì)供、受體的選擇和處理。選擇遺傳特性和生產(chǎn)性能優(yōu)秀的供體，有健康的體質(zhì)和正常繁殖能力的受體，供體和受體是同一物種。并用激素進(jìn)行同期發(fā)情處理，用促性腺激素對(duì)供體母牛做超數(shù)排卵處理。

②配種或人工授精。

③對(duì)胚胎的收集、檢查、培養(yǎng)或保存。配種或輸精后第7天，用特制的沖卵裝置，把供體母牛子宮內(nèi)的胚胎沖洗出來(lái)（也叫沖卵）。對(duì)胚胎進(jìn)行質(zhì)量檢查，此時(shí)的胚胎應(yīng)發(fā)育到桑椹或胚囊胚階段。直接向受體移植或放入-196℃的液氮中保存。

④對(duì)胚胎進(jìn)行移植。

⑤移植后的檢查。對(duì)受體母牛進(jìn)行是否妊娠的檢查。

(1)圖中在目的基因獲取前提取mRNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是防止提取的mRNA被RNA酶分解。通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因的過(guò)程中，兩個(gè)引物是熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Tag酶）的結(jié)合位點(diǎn)，也是子鏈延伸的起點(diǎn)。

(2)圖中Ⅱ過(guò)程在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，使用兩種限制酶同時(shí)切割目的基因和質(zhì)粒，這樣做的優(yōu)點(diǎn)是避免目的基因及質(zhì)粒的自身環(huán)化和隨意連接。

(3)小鼠Es細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上培養(yǎng)，Es細(xì)胞表現(xiàn)為只分裂而不發(fā)生分化的特點(diǎn)。Ⅳ過(guò)程中要將含外源基因的Es細(xì)胞導(dǎo)入囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，然后進(jìn)行胚胎移植。胚胎移植前，通常選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的囊胚或桑椹胚階段的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，采用胚胎分割技術(shù)，一次獲得多只相同性狀的后代。

(4) 由于轉(zhuǎn)基因表達(dá)產(chǎn)物存在于小鼠的乳汁中，檢測(cè)其體內(nèi)是否出現(xiàn)該藥用蛋白，在分子水平上的檢測(cè)方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)表明藥用蛋白基因已經(jīng)沒(méi)有轉(zhuǎn)錄或翻譯，形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品；若檢測(cè)不到藥用蛋白，說(shuō)明藥用蛋白基因沒(méi)有轉(zhuǎn)錄或翻譯。