Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚眙干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖（圖中數(shù)字序號(hào)表示的是相關(guān)過程）。請(qǐng)回答:

（1）過程①將進(jìn)行培養(yǎng)的上皮細(xì)胞注入去核的卵母細(xì)胞中，接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于__________________時(shí)期。

（2）過程②利用的技術(shù)是____________________，當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其_________分離出ES細(xì)胞。

（3）過程③中獲取的目的基因是____________________，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建_______________________，構(gòu)建之前可以根據(jù)_______________________設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。為了檢測ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因，可采用______________技術(shù)。

（4）按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有___________和耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）等。通測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用__________________進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培養(yǎng) 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) （正常的）Rag2基因 含（正常的）Rag2基因的基因表達(dá)載體 （正常的）Rag2基因的脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息） DNA分子雜交 限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗體

【解析】

題圖圖示是利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)Rag 2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養(yǎng)過程，③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞。然后將改造后的受體細(xì)胞經(jīng)過培養(yǎng)之后回輸?shù)交�因缺陷小鼠體內(nèi)獲得治療。

（1）MII中期的卵母細(xì)胞含有細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)和環(huán)境條件，故接受細(xì)胞核的卵母細(xì)胞應(yīng)處于MII中期，即過程①將進(jìn)行培養(yǎng)的上皮細(xì)胞注入去核的處于MII中期的卵母細(xì)胞中。

（2）過程②利用的技術(shù)是早期胚胎培養(yǎng)，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)將來發(fā)育成胚胎的各種組織，滋養(yǎng)層細(xì)胞將來發(fā)育成胎膜和胎盤，故當(dāng)重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出具有全能性的ES細(xì)胞。

（3）根據(jù)題干信息可知，過程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因，若要將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，需要構(gòu)建含（正常的）Rag2基因的基因表達(dá)載體，構(gòu)建之前可以根據(jù)Rag2基因的脫氧核苷酸序列（或堿基對(duì)序列或遺傳信息）設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。將目的基因?qū)��?/span>ES細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法，為了檢測ES細(xì)胞的DNA上是否插入了干擾素基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)。

（4）按此方法和圖示技術(shù)流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的技術(shù)包括基因工程、PCR技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，其中基因工程涉及的酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)涉及的酶有胰蛋白酶，PCR技術(shù)涉及的酶有耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）等。檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可采用抗原一抗體雜交法，即提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。