Question

1．多環(huán)芳香烴（PAHs）是一類高毒性有機(jī)污染物，由于具有致癌物和致突變性而受到關(guān)注．實(shí)驗(yàn)小組從土壤中分離出能降解PAHs的細(xì)菌，并對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)和計(jì)數(shù)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）實(shí)驗(yàn)小組從富含PAHs的土壤中取樣后，放置在以PAHs為唯一碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，其目的是增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌．
（2）將PAHs降解菌的菌液稀釋10⁵倍后取0.1mL分別涂布在3個(gè)平板中，經(jīng)培養(yǎng)，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別是79個(gè)、57個(gè)和41個(gè)，則樣液中的活菌數(shù)是5.9×10⁷個(gè)/mL．也可以在顯微鏡下采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)的方法統(tǒng)計(jì)樣液中PAHs降解菌的數(shù)量．
（3）若采用平板劃線法分離樣液中的PAHs降解菌，操作時(shí)接種環(huán)通過(guò)灼燒滅菌．在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液不宜過(guò)多，其原因是菌液過(guò)多會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積而不能獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落．示意圖A和B中，圖B表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果．

（4）若某一實(shí)驗(yàn)組平板上菌落的平均數(shù)為201個(gè)，而空白對(duì)照組的1個(gè)平板上出現(xiàn)了3個(gè)菌落，該結(jié)果說(shuō)明這次實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)了雜菌污染．

Answer 1

分析 1、無(wú)菌操作技術(shù)有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學(xué)藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法適用于接種工具、干熱滅菌法適用于玻璃器皿和金屬工具、高壓蒸汽滅菌法適用于培養(yǎng)基及容器的滅菌．
2、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．
稀釋平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞．計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)．

解答 解：（1）從土壤中分離出能降解PAHs的細(xì)菌需要使用選擇培養(yǎng)基，即需要使用以PAHs為唯一碳源的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌．
（2）根據(jù)題意可知，樣液中的活菌數(shù)是（79+57+41）÷3÷0.1×10⁵=5.9×10⁷個(gè)/mL．計(jì)數(shù)還可以采用血小板計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)的方法統(tǒng)計(jì)樣液中PAHs降解菌的數(shù)量．
（3）實(shí)驗(yàn)時(shí)，接種環(huán)需要采用灼燒滅菌的方法進(jìn)行滅菌．在涂布平板時(shí)滴加到培養(yǎng)基表面的菌液過(guò)多會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積而不能獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落．
（4）據(jù)圖分析可知，A平板是平板劃線法得到，B平板中的菌落均勻，是稀釋涂布平板法得到的．空白培養(yǎng)的培養(yǎng)基上有菌落說(shuō)明培養(yǎng)基被雜菌污染，所得到的數(shù)據(jù)沒(méi)有意義．
故答案為：
（1）增加PAHs分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離出目的菌
（2）5.9×10⁷     血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
（3）灼燒    菌液過(guò)多會(huì)出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積而不能獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落    B    
（4）雜菌污染

點(diǎn)評(píng) 微生物這部分內(nèi)容是高考試題的一個(gè)熱點(diǎn)一般體現(xiàn)在對(duì)微生物的篩選、培養(yǎng)和滅菌，考察的知識(shí)點(diǎn)有微生物的無(wú)菌操作、微生物的分離以及產(chǎn)品的提取，注意總結(jié)．