Question

19．絞股藍細胞中含有抗煙草花葉病毒（TMV）基因，可以合成一種抗TMV蛋白，葉片對TMV具有抗感染性．煙草是重要的經濟作物，由于TMV的感染會導致大幅度減產．研究人員利用轉基因技術培育出了抗TMV的煙草，主要流程如圖所示，請據(jù)圖回答下列問題．

（1）科學家首先從絞股藍細胞中提取抗TMV基因轉錄的RNA，然后合成目的基因．圖中過程①表示反轉錄，獲得的DNA必須在兩側添加啟動子和終止子，還要添加限制性核酸內切酶能識別切割的堿基序列．
（2）由圖分析，在過程③構建的重組Ti質粒上應該含有的標記基因是卡那霉素抗性基因，重組Ti質粒導入煙草體細胞的方法是農桿菌轉化法．
（3）在過程⑤培養(yǎng)基中需要添加卡那霉素、植物必需的各種營養(yǎng)成分和植物激素，以保證受體細胞能培養(yǎng)成再生植株．其中過程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質粒．
（4）在個體水平的鑒定過程中，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．

Answer 1

分析 由圖可知，①是逆轉錄過程，③是構建基因表達載體，④是將目的基因導入受體細胞．⑤是目的基因的檢測與鑒定，⑥是植物組織培養(yǎng)過程，據(jù)此答題．

解答 解：（1）過程①表示獲得的目的基因，是RNA通過逆轉錄獲得DNA，該DNA兩側應含有相關限制酶的酶切位點，兩端還必須有啟動子和終止子．
（2）由圖分析，⑤過程在含有卡那霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，說明構建的重組質粒上含有的標記基因是卡那霉素抗性基因．目的基因導入植物體細胞的方法常用農桿菌轉化法．
（3）過程⑤添加卡那霉素的作用是篩選含有目的基因的重組質粒．
（4）過程⑥需要對表達的產生進行鑒定，可采取抗原-抗體雜交，若從個體水平鑒定，可通過接種煙草花葉病毒的方法來確定植株是否具有抗性．
故答案為：
（1）反轉錄 啟動子 限制性核酸內切
（2）卡那霉素抗性 農桿菌轉化法
（3）篩選含有目的基因的重組質粒
（4）接種煙草花葉病毒

點評 本題考查基因工程和植物組織培養(yǎng)，理解基因工程培育轉基因植物過程是解題的關鍵．