Question

低溫蛋白酶是海洋嗜冷細(xì)菌分泌的酶類(lèi)，最適溫度在20℃左右，作為洗衣粉添加劑可在較低的溫度下達(dá)到理想的洗滌效果．如圖為分離可分泌低溫蛋白酶的某種嗜冷菌的操作步驟據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）分裝前，對(duì)培養(yǎng)基要進(jìn)行

 

操作．為避免雜菌污染，要及時(shí)進(jìn)行

 

操作．
（2）將擴(kuò)大培養(yǎng)后的深海微生物用

 

法接種到含酪蛋白的固體培養(yǎng)基表面，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，挑出形成透明圈的單一菌落，即為初選出的嗜冷菌．從嗜冷菌分泌的蛋白質(zhì)中分離出低溫蛋白酶的最常用的方法是

 

．
（3）為進(jìn)一步檢測(cè)分離出的嗜冷蛋白酶的最適溫度，將該菌按上圖所示分5組分別置于

 

中進(jìn)行培養(yǎng)，

 

組所對(duì)應(yīng)的溫度為最適溫度．
（4）為提高酶的利用率，可以采用

 

技術(shù)，常用的方法有

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：制備和應(yīng)用固相化酶

專(zhuān)題：

分析：滅菌是指利用強(qiáng)烈的理化因素殺滅物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子；高溫殺菌可以破壞蛋白質(zhì)、核酸等高分子化合物的活性，可分為灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌．細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中接種針、接種環(huán)等金屬用具采用火焰灼燒滅菌，培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸氣滅菌，玻璃器皿進(jìn)行干熱滅菌；高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個(gè)設(shè)備，一般壓力在100KPa，溫度在121℃的條件下，維持15-30分鐘用于培養(yǎng)基的滅菌．
稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)�然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基表面，進(jìn)行培養(yǎng)；在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落．平板劃線(xiàn)法通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面；在數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群，這就是菌落．
固定化技術(shù)包括包埋法、物理吸附法和化學(xué)結(jié)合法（交聯(lián)法），由于細(xì)胞相對(duì)于酶來(lái)說(shuō)更大，難以被吸附或結(jié)合，因此多采用包埋法；而酶小，容易從包埋的材料漏出，則采用物理吸附法或化學(xué)結(jié)合法．

解答： 解（1）培養(yǎng)基在分裝之前要先調(diào)試pH，然后分裝，再滅菌，對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌常用的方法是高壓蒸汽滅菌法．
（2）培養(yǎng)分離微生物時(shí)常用稀釋涂布平板法或平板劃線(xiàn)法；而分離不同種類(lèi)蛋白質(zhì)時(shí)常用電泳法．
（3）培養(yǎng)的過(guò)程需放在恒溫箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)；因?yàn)槭亲钸m溫度下的，透明圈與菌落直徑比值最大．
（4）可通過(guò)固定化酶來(lái)提高酶的利用率，固定化常用的方法是共價(jià)鍵結(jié)合法或物理吸附法．
故答案為：（1）調(diào)pH   高壓蒸汽滅菌
（2）稀釋涂布平板（或平板劃線(xiàn)）  電泳法
（3）恒溫箱 透明圈與菌落直徑比值最大
（4）固定化    共價(jià)鍵結(jié)合法 （或物理吸附法或包埋法）

點(diǎn)評(píng)：本題考查微生物的培養(yǎng)和分離、及固定化酶制備等的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力．