Question

【題目】EPO是促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin）的英文簡(jiǎn)稱，是一種激素樣物質(zhì)，可促進(jìn)體內(nèi)新紅細(xì)胞生成。人類已可通過基因工程合成EPO基因，并采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物。其過程如下：

請(qǐng)回答下列問題：

（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄得到 ，再通過PCR技術(shù)獲得大量EPO基因。

（2）供體母鼠通常情況下每次排卵8～12枚，為使其超數(shù)排卵，需注射 激素以排出更多的卵子，培養(yǎng)到 時(shí)期與獲能的精子相遇時(shí)，精子首先發(fā)生 反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精。

（3）①過程構(gòu)成了基因表達(dá)載體，內(nèi)部包括不可缺少的組成部分，其中 能驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。

（4）采用 技術(shù)，將重組表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵中，將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)液成分除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需添加 、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質(zhì)。

（5）當(dāng)胚胎發(fā)育至 時(shí)期，向受體移植，為獲得更多個(gè)轉(zhuǎn)基因胚胎，要將 進(jìn)行均等切割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。此外，移植前需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行 。

（6）若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉(cāng)鼠是否成功表達(dá)EPO，可以采用 技術(shù)對(duì)血液來進(jìn)行檢測(cè)。

Answer 1

【答案】

（1）cDNA（1分）

（2）促性腺 減數(shù)第二次分裂中期 頂體 （每空1分）

（3）啟動(dòng)子 （1分）

（4）顯微注射技術(shù) 維生素（每空1分）

（5）桑椹胚或囊胚 內(nèi)細(xì)胞團(tuán) 性別鑒定（每空2分）

（6）抗原—抗體雜交（2分）

【解析】

試題分析：

（1） 獲取EPO基因（目的基因），可從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，再經(jīng)PCR技術(shù)擴(kuò)增。

（2） 為使供體母鼠超數(shù)排卵，需注射促性腺激素。采集的卵母細(xì)胞需培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期才具備受精能力。當(dāng)卵子與獲能的精子相遇時(shí)，精子首先發(fā)生頂體反應(yīng)，穿越放射冠和透明帶，完成體外受精。

（3） 基因表達(dá)載體的組成部分中，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的是啟動(dòng)子。

（4） 將重組表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠受精卵中，通常采用顯微注射技術(shù)。發(fā)育培養(yǎng)液的成分除一些無機(jī)鹽和有機(jī)鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營(yíng)養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質(zhì)。

（5）胚胎移植時(shí)，應(yīng)選擇發(fā)育到桑椹胚或囊胚階段的胚胎。借助胚胎分割技術(shù)可獲得更多的轉(zhuǎn)基因胚胎，胚胎分割時(shí)，需要將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行均等切割，否則會(huì)影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育。依題意“采用中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)來獲取產(chǎn)物”可推知，在胚胎移植前，需對(duì)已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定。

（6） 若想檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因倉(cāng)鼠是否成功表達(dá)EPO，可以采用抗原—抗體雜交技術(shù)對(duì)血液來進(jìn)行檢測(cè)。