Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，負責血液中O2或CO2的運輸。請根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實驗流程補充完整：A為________________，B為____________________。凝膠色譜法是根據(jù)________________________而達到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除__________；離心速度過高和時間過長會使____________________一同沉淀，達不到分離的效果。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是________________。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20 mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是________________________________________________________。

（4）如果紅色區(qū)帶_________________，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對分子質(zhì)量的大小 雜蛋白（血漿蛋白） 白細胞等 蒸餾水和甲苯 模擬生物體內(nèi)的環(huán)境（保持體外pH和體內(nèi)一致等） 均勻一致的移動

【解析】

（1）樣品處理包括：紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液和透析。凝膠色譜操作包括：凝膠色譜柱的制作、凝膠色譜柱的裝填、樣品的加入和洗脫。
（2）凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)。
（3）洗滌紅細胞的目的是去除雜蛋白，洗滌干凈的標志是上清液中沒有黃色。
（4）分離血紅蛋白時，可明顯看到試管中的溶液分為4層：第一層為無色透明的甲苯層；第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層；第3層是紅色透明液體，是血紅蛋白的水溶液；第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。
（5）加樣順序是：調(diào)整緩沖液面、滴加透析樣品、樣品滲入凝膠床、再調(diào)整緩沖液面。
（6）如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動，說明色譜柱制作成功。

（1）樣品處理過程為：紅細胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析，所以A表示血紅蛋白的釋放。B表示樣品的加入和洗脫。凝膠色譜法的原理是分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動慢。即凝膠色譜法是根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小而達到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

（2）洗滌紅細胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白，釋放血紅蛋白的過程是讓紅細胞吸水脹破。離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。由于甲苯是表面活性劑的一種，可將細胞膜溶解，從而使細胞破裂。故釋放血紅蛋白的過程中起作用的是蒸餾水和甲苯。

（3）磷酸緩沖液（pH為7.0）能夠準確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻一致的移動；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。