Question

【題目】下圖為三種質粒和一個含目的基因的 DNA 片段，其中 Ap 為氨芐青霉素抗性基因，Tc 為四環(huán)素抗性基因，lacZ 為藍色顯色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割位點與復制原點之間的距離。已知1 kb＝1000個堿基對的長度。請回答下列問題：

（1）片段 D 為目的基因中的某一片段，則限制酶和 DNA 連接酶的作用部位依次是_______________ 、______________（填圖中數字標號））

（2）圖中能作為目的基因運載體最理想的質粒是__________（填A/B/C））據圖分析，其他兩種質粒一般不能作為運載體的理由分別是______________、_________。

（3）如果將目的基因和質粒 A 構建重組質粒,然后再用 EcoRⅠ酶切這個重組質粒，進行電泳觀察，可出現長度分別為 1.1 kb 和_________________kb 的兩個片段，或者長度分別為___________kb 、_________kb的兩個片段。

Answer 1

【答案】② ② B 質粒A缺少標記基因 質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被破壞 5.4 3.1 kb 3.4kb

【解析】

分析題圖：如圖所示為三種質粒和一個含目的基因的DNA片段示意圖．圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因。EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等為限制酶及其切割的位點與復制原點的距離。片段D中，①是氫鍵，②是磷酸二酯鍵。

（1）DNA聚合酶和DNA連接酶的作用部位均為磷酸二酯鍵，即圖中部位②。

（2）圖中質粒A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制．因此，能作為目的基因運載體最理想的質粒是B。

（3）目的基因和質粒A形成的重組質�？傞L度為4.0+2.5=6.5kb（質粒+切割出來的目的基因）、其中重組質粒含有兩個EcoRⅠ酶切位點，一個在插入的目的基因中，一個在原質粒中。若用EcoRⅠ酶切該重組質粒必然會產生2個片段，若產生的其中一個片段長度為1.1Kb，則說明另一個片段6.5-1.1=5.4kb；若目的基因與質粒A的連接位置與前一種剛好相反，重組質粒的總長度不變，但經EcoRⅠ酶切后產生的兩個片段長度不同，分別為（1.3-1.2）+（4.0-1.0）=3.1Kb、6.5-3.1=3.4Kb。