Question

重組酵母菌乙肝疫苗就是利用基因工程技術使乙肝病毒相關基因在酵母菌內表達并大規(guī)模培養(yǎng)，從而提取制成疫苗。

（1）下圖是獲取目的基因的流程：

①圖中基因組文庫 （小于/等于/大于）cDNA文庫。

②B過程需要的酶是 ；A、C過程中 （可以／不可以）使用同一種探針篩選含目的基因的菌株。

③目的基因Ⅰ和Ⅱ除從構建的文庫中分離外，還可以分別利用圖中 和 為模板直接進行PCR擴增，該過程中所用酶的顯著特點是 。

（2）構建基因表達載體時用限制酶切割DNA后可能產生黏性末端，也可能產生平末端，后者需用 （E·coil／T4） DNA連接酶通過催化 鍵使目的基因與質粒連接起來。為使目的基因在酵母菌細胞中高效表達，需要把來自cDNA文庫的目的基因片段正確插入表達載體的 和 之間。

（3）在導入表達載體時常用Ca+處理酵母菌，使其成為 細胞，再與表達載體于緩沖液中混合，在一定的溫度下完成轉化。

（4）為了檢測目的基因是否成功翻譯，可以用 技術，若沒有出現(xiàn)相應的雜交帶，則可能需要用 做探針來檢測是否轉錄出mRNA。

Answer 1