Question

【題目】綠色熒光蛋白（GFP)會發(fā)出綠色熒光，該蛋白質(zhì)在生物工程中有著廣闊的應(yīng)用前景。請據(jù)圖回答相關(guān)問題：

（1）形成重組質(zhì)粒時，如果限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是一G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因兩側(cè)各有一個酶Ⅱ的切點。在DNA連接酶和上述兩種不同限制酶的作用下，能否將質(zhì)粒和目的基因連接起來？_____________理由是__________。

（2）構(gòu)建重組質(zhì)粒時，限制酶切點應(yīng)位于_____________和_____________之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達(dá)。寫山該基因表達(dá)過程包含的信息傳遞圖解：______________________。

（3）在②過程進行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的篩選時的方法是_______________________。

（4）在核移植過程中，乙兔提供的細(xì)胞應(yīng)是______________________。

（5）通過推測氨基酸排序，可以找到______________，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強烈。

Answer 1

【答案】 可以連接 由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互補） 啟動子 終止子 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞發(fā)出綠色熒光 減數(shù)第二次分裂中期（次級）卵母細(xì)胞 對應(yīng)脫氧核苷酸序列

【解析】試題分析：可以看出該熒光克隆兔涉及了多項生物工程技術(shù)．首先導(dǎo)入目的基因的甲兔的成纖維細(xì)胞要經(jīng)過動物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與乙兔的卵細(xì)胞進行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母兔子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆兔．該過程中利用基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)。

（1）①限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，因此質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端為：．

②限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-，因此目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端為：．

③限制性內(nèi)切酶Ⅰ和限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點不同，但兩種切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA連接酶的作用下連接起來，形成重組DNA分子. 。

（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，終止子的作用是使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止，所以構(gòu)建重組質(zhì)粒時，限制酶切點應(yīng)位于啟動子和終止子之間，保證綠色熒光蛋白基因的正常表達(dá)．該基因表達(dá)過程包含的信息傳遞圖解：。

（3）在②過程進行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的篩選時，比較簡易的篩選方法是轉(zhuǎn)基因細(xì)胞能否發(fā)出綠色熒光。

（4）在核移植過程中，乙兔提供的細(xì)胞應(yīng)是減數(shù)第二次分裂中期（次級）卵母細(xì)胞。

（5）通過推測氨基酸排序，可以找到 對應(yīng)脫氧核苷酸序列，造出能吸收、發(fā)出不同顏色光的熒光蛋白，并能讓它們發(fā)光更久、更強烈。