Question

【題目】現(xiàn)代生物技術(shù)與技術(shù)應(yīng)用

已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原。 疫苗的生產(chǎn)和抗體的制備流程如圖所示。 請(qǐng)回答下列問(wèn)題

（1）圖中X的名稱是_____。

（2）A基因重組載體（ 重組質(zhì)粒） 在受體細(xì)胞中表達(dá)出A蛋白，該過(guò)程除證明了質(zhì)�？梢宰鳛檫\(yùn)載體外，還證明了_____。

A、質(zhì)粒能自我復(fù)制 B．質(zhì)粒有一個(gè)或多個(gè)酶切點(diǎn)

C．質(zhì)粒有標(biāo)記基因 D．生物間共用相同遺傳密碼子

（3）A基因在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。 為防止蛋白質(zhì)被降解，在實(shí)驗(yàn)中對(duì)選用受體細(xì)胞大腸桿菌的要求是_____（ 填文字）。

（4）在提取分離A蛋白生產(chǎn)過(guò)程中，要保持A蛋白的活性，需注意的事項(xiàng)有（ 多選）_____。

A、適宜的溫度 B．添加逆轉(zhuǎn)錄酶

C．適宜的pH 　　 D．添加蛋白酶抑制劑

形成有效的重組質(zhì)粒，選擇適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶很重要。 如圖1示意大腸桿菌質(zhì)粒的相關(guān)基因與限制酶切點(diǎn)；圖2示意有關(guān)限制酶在DNA分子中的具體切點(diǎn)。

（5）要成功轉(zhuǎn)入目的基因且重組效率較高，選擇限制酶的方案是_____，其原因是_____。

Answer 1

【答案】雜交瘤細(xì)胞 D 蛋白酶缺陷型 ACD 選用BamHⅠ和EcoRⅠ兩種限制酶 兩種限制酶切，形成的黏性末端不同，質(zhì)粒和目的基因不易重新自我結(jié)合

【解析】

由圖可知：①逆轉(zhuǎn)錄；②目的基因的獲取；③構(gòu)建基因表達(dá)載體；④把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；⑤用A蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行免疫處理，使B細(xì)胞發(fā)生增殖分化；⑥B細(xì)胞增殖分化出漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞；⑦細(xì)胞融合。X雜交瘤細(xì)胞。

結(jié)合質(zhì)粒和目的基因中的限制酶切點(diǎn)可知，不能選擇EcoRV進(jìn)行切割，因?yàn)槠鋾?huì)破壞目的基因；目的基因和載體共同含有的限制酶切點(diǎn)只有BamHⅠ和EcoRⅠ。

（1）由以上分析可知，圖中X是漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞。

（2）一種生物的基因能在另一種生物體內(nèi)表達(dá)，說(shuō)明生物間共用相同的遺傳密碼子。故選：D。

（3）A基因在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，表達(dá)出的蛋白質(zhì)可能會(huì)被降解。為防止蛋白質(zhì)被降解，根據(jù)酶的專一性原理可知，在實(shí)驗(yàn)中要求受體細(xì)胞是蛋白酶缺陷型大腸桿菌。

（4）影響酶活性的因素有溫度、pH和抑制劑等，因此在提取分離A蛋白生產(chǎn)過(guò)程中，要保持A蛋白的活性，需適宜的溫度、適宜的pH、添加蛋白酶抑制劑（防止A蛋白被分解）。故選：ACD。

（5）圖2中A基因兩側(cè)有限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ和HindⅠ的切割位點(diǎn)，為了防止構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化或反向連接，應(yīng)該用兩種不同的限制酶切割，又由于圖1質(zhì)粒上不含限制酶HindⅠ的切割位點(diǎn)，因此要成功轉(zhuǎn)入目的基因且重組效率較高，應(yīng)該選擇限制酶BamHⅠ和EcoRⅠ。