Question

【題目】家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力。將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥。

(1)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用___________酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入載體質(zhì)粒的啟動(dòng)子和___________之間。

(3)采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞。該PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和_________________。

(4)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最常用的方法是_______________。此方法的受體細(xì)胞多是______________。

(5) 將人干擾素基因?qū)爰倚Q細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)需要提供氣體環(huán)境：95%空氣＋5%CO2。O2是____________所必需的，CO2的主要作用_______________；培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的________________，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶（或膠原蛋白酶） 終止子 TaqDNA聚合酶（耐高溫DNA聚合酶） 顯微注射 受精卵（卵母細(xì)胞） 細(xì)胞代謝 維持培養(yǎng)液的pH 抗生素

【解析】本題考查基因工程和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生能理解基因工程的基本操作程序，理解動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件和技術(shù)要點(diǎn)，進(jìn)行準(zhǔn)確答題。

(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，常用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）酶動(dòng)物組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞。

(2)為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入載體質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間。

(3)PCR技術(shù)的原理是體外DNA復(fù)制，PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg2+）、水，4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、引物 和TaqDNA聚合酶（耐高溫DNA聚合酶）。

(4)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞最常用的方法是顯微注射，此方法的受體細(xì)胞多是受精卵（或卵母細(xì)胞）。

(5)動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)需要提供氣體環(huán)境，即95%空氣＋5%CO2。其中O 2是細(xì)胞代謝（有氧呼吸）所必需的，CO2的主要作用維持培養(yǎng)液的pH；培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的雜菌污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。