Question

【題目】土壤中含有能將難溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)變成植物可以吸收利用的可溶性磷的優(yōu)良解磷菌株Q。下圖1表示制備固體培養(yǎng)基過程中的某操作，圖2是科研人員從土壤中分離出菌株Q的部分過程示意圖。

請回答下列問題：

（1）圖1所示操作稱為__________________，待平板冷凝后__________，以防止__________________。

（2）圖2所示接種方法是_______________________。在3個(gè)平板上分別接入0．1 mL稀釋液，經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上菌落數(shù)分別是38、42、40，則1 g土壤中的活菌數(shù)約為__________________個(gè)。

（3）圖是某同學(xué)利用不同于圖2方法分離菌株Q的示意圖。下列對其操作及結(jié)果的敘述錯(cuò)誤的有_______。

a．操作前用無水乙醇對雙手進(jìn)行消毒處理

b．劃線時(shí)沾有菌種的接種環(huán)不能插入培養(yǎng)基中

c．只有在⑤區(qū)域中才能得到所需菌落

d．整個(gè)過程需要對接種環(huán)進(jìn)行6次灼燒

（4）固體培養(yǎng)基中難溶性磷酸鹽在菌株Q的作用下溶解，會在菌落周圍形成透明圈（如下圖所示），透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解難溶磷酸鹽的能力大小。下表是初步篩選出的三種優(yōu)良解磷菌株。

菌株	透明圈直徑(D)	菌落直徑(d)
M—3—01	18．8	12．3
B3—5—6	20．7	8．0
T—4—01	9．1	6．5

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，溶解難溶性磷酸鹽能力最強(qiáng)的菌株是______________。該菌種分離純化后，常用______________________法進(jìn)行長期保存。

Answer 1

【答案】倒平板 倒置 皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基 稀釋涂布平板法 4×108 a、c B3－5－6 甘油管藏

【解析】

1、微生物常用的接種方法：

①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

2、計(jì)算樣品菌液中的菌株數(shù)時(shí)，每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表樣品菌液的稀釋倍數(shù)。

（1）圖1所示操作稱為倒平板，待平板冷凝后需要將其倒置，以防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，對培養(yǎng)基造成污染。

（2）圖2所示接種方法是稀釋涂布平板法，1g土壤共稀釋了106倍。平板上生長的平均菌落數(shù)=(38+42+40)÷3=40個(gè)，每克樣品中的菌株數(shù)=(C÷V)×M=(40÷0.1)×106=4×108個(gè)。

（3）a、操作前用70%的酒精對接種人員的雙手進(jìn)行消毒處理，a錯(cuò)誤；

b、劃線時(shí)沾有菌種的接種環(huán)不應(yīng)劃破培養(yǎng)基表面，b正確；

c、在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過培養(yǎng)即可獲得所需菌落，c錯(cuò)誤；

d、在每次劃線前和最后一次劃線結(jié)束均需對接種環(huán)滅菌，因此需要對接種環(huán)進(jìn)行6次灼燒，d正確。

故選ac。

（4）根據(jù)實(shí)驗(yàn)原理中“透明圈直徑（D）與菌落直徑（d）的比值（D/d）代表微生物溶解難溶磷酸鹽的能力大小”，結(jié)合表格數(shù)據(jù)可以確定溶解難溶性磷酸鹽能力最強(qiáng)的菌株是B3-5-6。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏法。