Question

10．農業(yè)科技工作者在煙草中找到一種抗病基因，現(xiàn)擬采用基因工程技術將該基因轉入棉細胞中，培育抗病棉品系．請回答下列問題．
（1）要獲得該抗病基因，可采用從基因文庫中獲取、化學方法（人工合成PCR擴增） 等方法．將抗病基因轉入棉細胞時，最常用的運載體是質粒．
（2）若運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如圖示：則能與該運載體連接的抗病基因分子末端是A．

（3）切割完成后，需用DNA連接 酶將運載體與該抗病基因連接，得到重組DNA分子．
（4）將抗病基因轉入棉細胞時，可先將重組DNA分子導入農桿菌Ti質粒 的T-DNA上，再用該農桿菌去侵染棉細胞，從培養(yǎng)得到的植株中篩選獲得抗病棉．
（5）這種方法比較經濟和有效，稱作農桿菌轉化法．除此之外，還有基因槍法和花粉管通道法等．
（6）將含抗病基因的棉細胞培養(yǎng)得到完整抗病棉還需用植物組織培養(yǎng) 技術．

Answer 1

分析 1、基因工程至少需要三種工具：限制性核酸內切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
2、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達載體的構建；③將目的基因導入受體細胞；④目的基因的檢測與鑒定．
3、植物組織培養(yǎng)技術的原理是植物細胞具有全能性．

解答 解：（1）抗病基因屬于目的基因，獲取目的基因的方法：從細胞中直接分離獲得、化學方法人工合成等．將目的基因導入植物細胞常采用農桿菌轉化法，即借助農桿菌中的Ti質粒作為運載體．
（2）含有相同黏性末端的DNA分子片段才能在DNA連接酶的作用下連接起來，若載體被切割后，得到的分子末端序列為，則能與該載體連接的抗病基因分子末端是．
（3）切割完成后，需采用DNA連接酶將載體與該抗病基因連接形成重組DNA分子．
（4-5）再采用農桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞，即將連接得到的DNA分子導入農桿菌Ti質粒的T-DNA上，然后用該農桿菌去感染棉花細胞，進而將目的基因導入受體細胞．將目的基因導入植物細胞除了用到農桿菌轉化法，還可采用基因槍法、花粉管通道法．
（6）將轉基因植物細胞培育常轉基因植株需要采用植物組織培養(yǎng)技術．
故答案為：
（1）化學方法（人工合成PCR擴增）      質粒
（2）A
（3）DNA連接            重組DNA
（4）Ti質粒               棉細胞
（5）農桿菌轉化              花粉管通道法
（6）植物組織培養(yǎng)

點評 本題考查基因工程、植物組織培養(yǎng)的相關內容，要求考生掌握基因工程常用的三種工具及作用；識記基因工程的操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的原理及應用，能結合所學的知識答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．