現(xiàn)有甲、乙兩種可能有一定毒性的化學(xué)物質(zhì),實(shí)驗(yàn)室研究人員計(jì)劃通過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)鑒定它們是否有毒性并比較二者毒性的強(qiáng)弱.請(qǐng)你以一個(gè)研究人員的身份參與此項(xiàng)研究,完成下列實(shí)驗(yàn)報(bào)告差回答有關(guān)問(wèn)題.
Ⅰ.實(shí)驗(yàn)原理:
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根據(jù)這種變異細(xì)胞占全部培養(yǎng)細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)(以下稱Q值),可判斷該化學(xué)物質(zhì)的毒性.
Ⅱ.實(shí)驗(yàn)材料:活的小白鼠胚胎
Ⅲ.藥品用具:胰蛋白酶液、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液、動(dòng)物細(xì)胞固定液、適宜濃度的龍膽紫溶液、滴管、培養(yǎng)皿、剪刀、錐形瓶、培養(yǎng)瓶、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、顯微鏡實(shí)驗(yàn)步驟:
Ⅳ.實(shí)驗(yàn)步驟
(1)制備細(xì)胞懸浮液.
把活的小白鼠胚胎放在培養(yǎng)皿中剪碎,轉(zhuǎn)入錐形瓶中,加入胰蛋白酶液處理,使胚胎組織離散成單個(gè)細(xì)胞,再加入動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液,制成細(xì)胞懸浮液.
(2)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng).
①取A、B、C三個(gè)潔凈的培養(yǎng)瓶,消毒滅菌,加入
;
②向A培養(yǎng)瓶中加入化學(xué)物質(zhì)甲,向B培養(yǎng)瓶中加入化學(xué)物質(zhì)乙,并將培養(yǎng)瓶搖勻.
③C瓶
(3)制作臨時(shí)裝片.
①當(dāng)細(xì)胞增殖到大約8代左右時(shí),同時(shí)從恒溫箱中取出3個(gè)培養(yǎng)瓶,用胰蛋白酶液處理,使培養(yǎng)的細(xì)胞從瓶壁上脫落,再加入動(dòng)物細(xì)胞固定液以便迅速殺死細(xì)胞并固定細(xì)胞.
②靜置一段時(shí)間后,分別從各培養(yǎng)瓶底部吸取適量的細(xì)胞懸浮液,滴在與培養(yǎng)瓶有相同編號(hào)的載玻片的中央,滴加
,3-5min后,蓋上蓋玻片.
(4)鏡檢和統(tǒng)計(jì).
把臨時(shí)裝片放在顯微鏡下,先用低倍鏡后用高倍鏡,尋找處于
期的細(xì)胞,并與
對(duì)比以確認(rèn)發(fā)生變異的細(xì)胞,同時(shí)統(tǒng)計(jì)該期變異的細(xì)胞占該期細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)(Q值).
Ⅴ.結(jié)果分析與結(jié)論:
經(jīng)研究人員實(shí)驗(yàn)得知,A、B、C三個(gè)培養(yǎng)瓶的Q值依次為:Q
A=1.3%,Q
B=12.5%,Q
C=0.1%,由此可知該實(shí)驗(yàn)的結(jié)論是:①
②
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