Question

【題目】回答下列有關(guān)基因表達(dá)和生物工程問(wèn)題。

(1）基因工程是生物工程核心技術(shù)。下列是分子實(shí)驗(yàn)室中構(gòu)建產(chǎn)生胰島素基因工程菌的部分操作，正確流程是____________。（用題中編號(hào)排序）

①篩選含有胰島素基因的受體細(xì)胞 ②胰島素基因與運(yùn)載體重組

③重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 ④獲取胰島素基因

下圖所示為用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因(4kb，lkb=1000個(gè)堿基對(duì)長(zhǎng)度)及其上DNA片段示意圖。

(2）片段D為目的基因中的某一片段，有關(guān)敘述正確的是_________（多選）。

A.若圖中的ACT能決定一個(gè)氨基酸，則ACT可稱(chēng)為一個(gè)密碼子

B.DNA連接酶作用于②處，DNA解旋酶作用于①處

C.若只用片段D中的3個(gè)堿基對(duì)，則可以排列出43種片段

D.同一脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個(gè)堿基之間依次經(jīng)過(guò)“一脫氧核糖—磷酸基—脫氧核糖—”連接

下圖所示為三種質(zhì)粒示意圖。圖中AP為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。EcoRⅠ(0.7Kb)、PvuⅠ(0.8Kb)等為限制酶及其切割的位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。復(fù)制原點(diǎn)是在基因組上復(fù)制起始的一段序列，是指質(zhì)粒在受體細(xì)胞中復(fù)制時(shí)的起點(diǎn)。

(3）圖中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C能否作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒？__________(能/否)。為什么，

請(qǐng)說(shuō)明理由 __________________________________________________________________.

(4）用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒（EcoRⅠ在目的基因和質(zhì)粒上的酶切位點(diǎn)如上兩圖所示)，則進(jìn)行電泳后觀察可出現(xiàn)長(zhǎng)度為1.1kb和_____kb,或者分別是_____kb和______kb兩個(gè)片段。（重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)之間的堿基對(duì)忽略不計(jì)）。

Answer 1

【答案】 ④②③① BD 否 質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制 5.6 3.1 3.6

【解析】【試題分析】

1.基因工程的基本操作程序是：目的基因的獲取→基因表達(dá)載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→目的基因的檢測(cè)與鑒定。

2. 本題主要是對(duì)基因表達(dá)載體的構(gòu)建的相關(guān)知識(shí)進(jìn)行綜合考查，有一定的難度。需要考生對(duì)所學(xué)知識(shí)進(jìn)行歸納梳理、把握知識(shí)的內(nèi)在聯(lián)系，再結(jié)合題意，一步一步認(rèn)真作答，才能順利解題。

（1）根據(jù)基因工程的基本操作程序可推知，構(gòu)建產(chǎn)生胰島素基因工程菌的流程是④獲取胰島素基因、②胰島素基因與運(yùn)載體重組、③重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞、①篩選含有胰島素基因的受體細(xì)胞。

（2）密碼子是由DNA轉(zhuǎn)錄形成的信使RNA分子上的三個(gè)連續(xù)堿基組成的，若圖中的ACT能決定一個(gè)氨基酸，則其對(duì)應(yīng)的密碼子是UGA，A項(xiàng)錯(cuò)誤；DNA連接酶作用于②磷酸二酯鍵處，DNA解旋酶作用于①氫鍵處，B項(xiàng)正確；若只用片段D中的3個(gè)堿基對(duì)（堿基對(duì)已經(jīng)確定，而且是三種不同的堿基對(duì)），則可以排列出3×2×1＝6種片段，C項(xiàng)錯(cuò)誤；結(jié)合圖示可知，同一脫氧核苷酸鏈中相鄰的兩個(gè)堿基之間依次經(jīng)過(guò)“一脫氧核糖—磷酸基—脫氧核糖—”連接，D項(xiàng)正確。

（3）據(jù)圖可知，質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因；質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí)，復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割，會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制。因此，圖中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C不能作為目的基因運(yùn)載體最理想的質(zhì)粒。

（4）據(jù)圖可知，目的基因中除了有限制酶（PvuⅠ）的切點(diǎn)外，還存在一個(gè)限制酶EcoRⅠ的切割位點(diǎn)，可以把目的基因切割成1.0kb和3.0kb兩種長(zhǎng)度的片段。用EcoRⅠ完全酶切目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒，則進(jìn)行電泳后觀察可出現(xiàn)長(zhǎng)度為0.1＋1.0＝1.1kb（質(zhì)粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因時(shí)形成的小片段）和2.7－0.1＋3.0＝5.6kb（質(zhì)粒切割后形成的大的片段＋切割目的基因時(shí)形成的大片段）；如果目的基因反過(guò)來(lái)插入，則進(jìn)行電泳后觀察可出現(xiàn)長(zhǎng)度為0.1＋3.0＝3.1kb（質(zhì)粒切割后形成的小的片段＋切割目的基因時(shí)形成的大片段）和2.7－0.1＋1.0＝3.6kb（質(zhì)粒切割后形成的大的片段+切割目的基因時(shí)形成的小片段）。