Question

【題目】植物基因工程中，往往用光誘導型啟動子(PrbcS)使目的基因表達，其結合T基因后能使目的基因更高水平表達。下圖中①和②都為基因表達載體構建過程中的中間載體，請分析重組載體的部分構建過程并回答下列問題：

注：Ampr/Kmr分別為氨芐青霉素/卡那霉素抗性基因。origin為復制原點，其余為限制酶酶切位點。

（1）對雙子葉植物進行基因工程改造最常用的方法是____________，還需結合__________技術才能獲得新性狀的植株。

（2）中間載體通常用______________法導入微生物中擴增，含有中間載體②PrbcS*T的微生物________（“能”或“不能”）在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中生長，________（“能”或“不能”）在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長。

（3）經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，經圖示信息分析，Prbcs*T的長度約為____________________。據(jù)圖分析，中間載體②2B形成中間載體②PrbcS*T，需要使用限制酶_________________切割。

（4）在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點的方法是：設計包含_________識別序列的引物，然后用PCR技術擴增。

Answer 1

【答案】農桿菌轉化法 植物組織培養(yǎng) 感受態(tài)細胞 能 不能 1.7 kb HindⅢ和EcoRⅠ NcoⅠ

【解析】

本題考查基因工程和植物細胞工程的相關知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學知識要點，把握知識間內在聯(lián)系，形成知識網絡結構的能力；能運用所學知識，準確判斷問題的能力。

（1）將目的基因導入雙子葉植物常利用農桿菌轉化法；要想獲得轉基因植物，還需要對導入目的基因的受體細胞進行植物組織培養(yǎng)才能獲得新性狀的植株；

（2）將中間載體導入微生物時常先用鈣離子處理微生物使其成為感受態(tài)，易于吸收中間載體，該種方法為感受態(tài)細胞法；由圖可知，中間載體②上含卡那霉素抗性基因，而不含氨芐青霉素抗性基因，故含有中間載體②PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中生長，而不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生長；

（3）由圖可知，中間載體②的長度為2.7kb，經酶切后凝膠電泳，測得2B片段為0.4kb，設Prbcs*T的長度為y，則2.7-0.4+y=4kb，解得y=1.7kb；根據(jù)圖示中中間載體①PrbcS*T右側的酶切位點和中間載體②-2B右側的酶切位點可知，中間載體②2B形成中間載體②PrbcS*T，需要使用限制酶HindⅢ和EcoRⅠ切割；

（4）可設計包含NcoⅠ識別序列的引物，然后用PCR技術擴增，即可在T基因前“點突變引入NcoⅠ”酶切位點。