Question

【題目】從自然界篩選嗜鹽菌的一般步驟是：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測定。

（1）培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從____________環(huán)境采集。

（2）富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其在群落中的數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對嗜鹽產(chǎn)淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇以________為唯一碳源的培養(yǎng)基，并在高鹽條件下培養(yǎng)。在富集培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能__________。

（3）下面兩圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解，請分析接種的具體方法。

獲得圖A效果的接種方法是___________。獲得圖B效果的接種方法是__________，利用A的方法在5個(gè)平板上各接種稀釋倍數(shù)為103的菌液樣品（涂布體積為0.2mL），培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上的菌落數(shù)分別為96、100、108、112、430，則每升原菌液樣品中細(xì)菌數(shù)為___________

（4）采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)的目的是____________________________。

Answer 1

【答案】高鹽 淀粉 增加培養(yǎng)液中的溶氧量 稀釋涂布平板法 平板劃線法 5.2×108 防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基（或避免培養(yǎng)基中水分的過快揮發(fā)）

【解析】

1、微生物常見的接種的方法①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性；b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；③計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。

（1）不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。噬鹽菌的菌樣應(yīng)從高鹽環(huán)境采集，如高鹽海灘等。

（2）根據(jù)要求，對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基，并在高溫條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，目的有兩個(gè)，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能增加培養(yǎng)液中的溶氧量。

（3）圖A菌落分布較均勻 接種方法是稀釋涂布平板，圖B菌落集中呈線狀，接種方法是平板劃線法平板中菌落數(shù)在30-300以內(nèi)進(jìn)行計(jì)數(shù)，故每升原菌液樣品中細(xì)菌數(shù)為：（96+100+108+112）÷4÷0.2×103×103=5.2×108。

（4）防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基（或避免培養(yǎng)基中水分的過快揮發(fā)），故固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)。