Question

13．EPO是促紅細胞生成素（Erythropoietin）的英文簡稱，是一種激素樣物質，可促進體內新紅細胞生成．人類已可通過基因工程合成EPO基因，并采用中國倉鼠卵巢（CHO）細胞表達系統(tǒng)來獲取產物．其過程如下：請回答下列問題：

（1）從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉錄得到單鏈DNA，再通過PCR技術獲得大量EPO基因．
（2）從供體母鼠的卵巢中獲取的卵子需要在體外培養(yǎng)到減數第二次分裂中期期才能與獲能的精子受精，受精作用完成的標志是雌雄原核融合．
（3）①過程構建了基因表達載體，內部包括多個不可缺少的組成部分，其中啟動子能驅動基因的轉錄．
（4）采用顯微注射技術，將重組表達載體導入小鼠受精卵中，然后將受精卵移入發(fā)育培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，當胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚期，向受體母牛進行移植．此外，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．
（5）若想檢驗轉基因倉鼠是否成功表達EPO，可以采用抗原-抗體雜交技術對血液來進行檢測．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術擴增和人工合成．
2、基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
3、將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
4、目的基因的檢測與鑒定：（1）分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術．（2）個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）獲取目的基因的方法可通過反轉錄法，故從人體組織中提取EPO的mRNA，通過逆轉錄得到cDNA，再通過PCR技術獲得大量EPO基因．
（2）卵子需培養(yǎng)到減數第二次分裂中期時才能與獲能的精子受精．受精作用完成的標志是雌雄原核融合．
（3）①過程為形成基因表達載體的過程，基因表達載體包括啟動子、終止子等，其中啟動子為RNA聚合酶結合的部位，能驅動基因的轉錄．
（4）將重組表達載體導入動物細胞中常采用顯微注射技術技術．胚胎移植時應該選擇桑椹胚或囊胚進行移植．動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液成分除一些無機鹽和有機鹽類外，還需添加維生素、激素、氨基酸、核苷酸等營養(yǎng)成分，以及血清（血漿）等物質．由于是采用中國倉鼠卵巢（CHO）細胞表達系統(tǒng)來獲取產物，因此移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行性別鑒定．
（5）檢測目的基因是否表達應該采用抗原-抗體雜交技術．
故答案為：
（1）逆轉錄
（2）減數第二次分裂中期    獲能    雌雄原核融合
（3）啟動子
（4）顯微注射  桑椹胚或囊胚   性別鑒定
（5）抗原-抗體雜交

點評 本題以“促紅細胞生成素”的合成為題材，考查基因工程和植物細胞工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，識記植物組織培養(yǎng)的原理及應用，能結合題中信息準確答題．