Question

16．工廠的污水池含有一種有害的、難以降解的有機(jī)化合物A．研究人員用化合物A、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）．實(shí)驗(yàn)的主要步驟如圖1所示．請分析回答下列問題．

（1）加入化合物A的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．化合物A可為目的菌提供生長所需的C源和N源等營養(yǎng)物質(zhì)．若想對(duì)初步篩選得到的目的菌進(jìn)行純化并計(jì)數(shù)，可采用的接種方法是稀釋涂布平板法．
（2）微生物培養(yǎng)過程中，防止雜菌污染的關(guān)鍵技術(shù)是防止外來雜菌的污染（無菌技術(shù)），為了排除雜菌污染如何設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)不接種的空白培養(yǎng)基，證明培養(yǎng)基制備是否被雜菌污染．
（3）在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)研究中，常需要進(jìn)行微生物的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)．圖2是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上有很多注意事項(xiàng)．請列舉兩項(xiàng)．①每次劃線前要灼燒接種環(huán)　②冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃�、凼孜矃^(qū)不重疊．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、分析圖解可知，圖1表示稀釋涂布平板法，圖2表示平板劃線法．
3、平板劃線操作的注意事項(xiàng)
①第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)滅菌；
②灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；
③劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連；
④劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破．

解答 解：（1）根據(jù)題意可知，實(shí)驗(yàn)需要“篩選到能高效降解化合物A的細(xì)菌”，因此加入化合物A的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．根據(jù)題干信息可知，該培養(yǎng)基中含有“化合物A、磷酸鹽以及微量元素”，由此可以確定，化合物A可為目的菌提供生長所需的C源和N源等營養(yǎng)物質(zhì)．若想對(duì)初步篩選得到的目的菌進(jìn)行純化并計(jì)數(shù)，可采用的接種方法是稀釋涂布平板法．
（2）微生物培養(yǎng)過程中，防止雜菌污染的關(guān)鍵技術(shù)是防止外來雜菌的污染（無菌技術(shù)），為了排除雜菌污染如何設(shè)計(jì)對(duì)照實(shí)驗(yàn)不接種的空白培養(yǎng)基，證明培養(yǎng)基制備是否被雜菌污染．
（3）圖2是利用平板劃線法進(jìn)行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，為達(dá)到這一目的，操作上有很多注意事項(xiàng)，如：①每次劃線前要灼燒接種環(huán)�、诶鋮s后從上一區(qū)劃線末端開始劃�、凼孜矃^(qū)不重疊．
故答案為：
（1）選擇  　  C源和N源      稀釋涂布平板法
（2）防止外來雜菌的污染（無菌技術(shù)）    不接種的空白培養(yǎng)基，證明培養(yǎng)基制備是否被雜菌污染 
（3）①每次劃線前要灼燒接種環(huán)　②冷卻后從上一區(qū)劃線末端開始劃�、凼孜矃^(qū)不重疊

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記培養(yǎng)基的成分和培養(yǎng)條件，掌握微生物分離與純化的方法與步驟，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．