Question

18．炭疽桿菌能引起人畜患炭疽病．炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀．對(duì)炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的寄主專一性，通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診．
細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落．
細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程圖如圖所示．

（1）對(duì)配制的液體培養(yǎng)基要采用髙壓蒸汽方法滅菌．培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與凋節(jié)pH的先后順序是先調(diào)節(jié)pH，后滅菌．
（2）挑選可疑菌后進(jìn)行接種時(shí)，放在35℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是細(xì)菌大量繁殖．圖中的對(duì)照組試管中應(yīng)加入等量生理鹽水．
（3）圖中兩組試管同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，進(jìn)行比較，若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度降低（填“提高”、“降低”、“不變”），則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染．此實(shí)驗(yàn)依據(jù)的原理是實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸．
（4）在對(duì)微生物進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)．取0.2mL樣品，用固體培養(yǎng)基對(duì)其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板，菌落數(shù)分別是200、180、220．則樣品中微生物的數(shù)量為1000個(gè)/mL．該統(tǒng)計(jì)結(jié)果低于（填“低于”、“髙于”）實(shí)際值．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基的基本成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊生長因子；
2、無菌操作，包括滅菌和消毒兩種方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；滅菌的方法有干熱滅菌、灼燒滅菌和高壓蒸汽滅菌；
3、微生物的接種：微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，常用來統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)目的方法是稀釋涂布平板法．
4、微生物實(shí)驗(yàn)室分離中配制培養(yǎng)基的操作步驟：計(jì)算→稱量→溶解→調(diào)pH→滅菌步驟．

解答 解：（1）對(duì)培養(yǎng)基滅菌常用高壓蒸汽滅菌法；培養(yǎng)基的制備步驟為：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌和倒平板．
（2～3）接種可疑菌后，35℃培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)菌大量繁殖，液體培養(yǎng)基變渾濁．對(duì)照組試管中應(yīng)加入等量生理鹽水．與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)培養(yǎng)6小時(shí)后，由于實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸，因此若實(shí)驗(yàn)組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對(duì)照組低，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染；反之則排除．
（4）在對(duì)微生物進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)．取0.2mL樣品，用固體培養(yǎng)基對(duì)其培養(yǎng)，最后統(tǒng)計(jì)三個(gè)平板，菌落數(shù)分別是200、180、220．則樣品中微生物的數(shù)量為$\frac{200+180+220}{3}$×$\frac{1}{0.2}$=1000個(gè)/mL．由于兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在培養(yǎng)基上只能觀察到一個(gè)菌落，因此該統(tǒng)計(jì)結(jié)果低于實(shí)際值．
故答案為：
（1）髙壓蒸汽       先調(diào)節(jié)pH，后滅菌
（2）細(xì)菌大量繁殖         等量生理鹽水
（3）降低    實(shí)驗(yàn)組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽桿菌，使細(xì)菌死亡，溶液變澄淸
（4）1000      低于

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識(shí)記培養(yǎng)基的種類及功能，掌握培養(yǎng)基的制備過程；識(shí)記幾種微生物常用的兩種方法，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．