Question

【題目】人的S細胞可以產生某種具有臨床價值的蛋白質，該蛋白質由基因yie編碼。目前可利用現(xiàn)代生物技術生產該蛋白質�；卮鹣铝袉栴}：

（1）要獲得yie基因，可從人的S細胞中提取______作為模板，在逆轉錄酶的催化下合成互補DNA，再利用_______技術在體外擴增獲得大量yie基因。

（2）通過農桿菌轉化法可將yie基因導入某種植物的葉肉細胞中。若該葉肉細胞經培養(yǎng)、篩選等得到了yie基因能穩(wěn)定表達的愈傷組織，則說明yie基因已經_____。把愈傷組織放在搖床上，通過____培養(yǎng)可以獲得單細胞，這種單細胞具有_______細胞的特征，最終可以形成植株。

（3）也可將yie基因通過__________方法注入植物的原生質體。為獲取原生質體，需要制備含__________酶以及滲透壓穩(wěn)定劑、細胞膜保護劑等的反應液。將外植體放入反應液后要嚴格控制好溫度、pH和___________，避免脆弱的原生質體受到持續(xù)的傷害。

Answer 1

【答案】mRNA PCR 整合到染色體DNA上 液體懸浮 胚性 顯微注射 纖維素酶和果膠 反應時間

【解析】

（1）逆轉錄是在逆轉錄酶的催化下，以RNA為模板合成DNA的過程。利用PCR技術可以大量擴增目的基因。農桿菌的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。（2）將含有愈傷組織培養(yǎng)物的試管放在搖床上，通過液體懸浮培養(yǎng)可以分散成單細胞，這種單細胞的細胞質豐富、液泡小而細胞核大，這是胚性細胞的特征。在適宜的培養(yǎng)基上，這種單細胞可發(fā)育成胚狀體，胚狀體繼續(xù)發(fā)育，可以形成植株。（3）利用顯微注射法可將目的基因導入受體細胞（包括原生質體）中。植物原生質體獲得的方法是：在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液環(huán)境（較高滲透壓）下，用纖維素酶和果膠酶混合液處理實驗材料，將細胞壁消化除去，獲得球形的原生質體。

(1) yie基因屬于目的基因，獲取目的基因可以采用逆轉錄法，即從相應的細胞中提取mRNA作為模板，在逆轉錄酶的催化下合成互補DNA。利用PCR技術可以在生物體外大量擴增目的基因。

(2) 農桿菌的Ti質粒上的T-DNA可轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上。根據(jù)農桿菌的這一特點，如果將yie基因插入到Ti質粒的T-DNA上，通過農桿菌的轉化作用，就可以把yie基因整合到染色體DNA上。把愈傷組織放在搖床上，通過液體懸浮培養(yǎng)，可以獲得具胚性細胞特征（細胞質豐富、液泡小而細胞核大）的單細胞。

(3) 將yie基因注入植物的原生質體中，可以采用顯微注射的方法。用纖維素酶和果膠酶水解植物細胞的細胞壁，可以獲得分離的植物細胞原生質體。外植體放入反應液后要嚴格控制好溫度、pH和反應時間，避免脆弱的原生質體受到持續(xù)的傷害。