Question

為了解基因結構，通常選取一特定長度的線性DNA分子，先用一種限制酶切割，通過電泳技術將單酶水解片段分離，計算相對大��；然后再用另一種酶對單酶水解片段進一步降解，分析片段大�。�下列是某小組進行的相關實驗．

已知一線性DNA序列共有5 000bp（bp為堿基對）	第一步水解	產(chǎn)物（單位：bp）	第二步水解	產(chǎn)物（單位：bp）
	A酶切割	2 100	第一步水解產(chǎn)物分離后， 分別用B酶切割	1 900　200
		1 400		800　600
		1 000		1 000
		500		500
	B酶切割	2 500	將第一步水解產(chǎn)物分離后， 分別用A酶切割	1 900　600
		1 300		800　500
		1 200		1 000　200
	經(jīng)A酶和B酶同時切割	1 900　1 000　800　600　500　200

（1）該實驗設計主要體現(xiàn)了

 

原則．
（2）由實驗可知，在這段已知序列DNA分子上，A酶和B酶的識別位點分別為

 

個和

 

個．
（3）根據(jù)表中數(shù)據(jù)，請在圖1中標出相應限制性酶的酶切位點．
（4）已知BamH 與BglⅡ的識別序列及切割位點如圖2所示，用這兩種酶和DNA連接酶對一段含有數(shù)個BamHⅠ和BglⅡ識別序列的DNA分子進行反復的切割、連接操作，若干循環(huán)后和

 

序列明顯增多，該過程中DNA連接酶催化

 

鍵的形成．
（5）一個基因表達載體的組成除了目的基因外，還必須有

 

、

 

及標記基因．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：限制性核酸內(nèi)切酶是可以識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內(nèi)切酶，簡稱限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段產(chǎn)物，說明酶A有3個切割位點；B酶切割后有3段產(chǎn)物，說明酶B有2個切割位點．

解答： 解：（1）設計實驗的基本原則要有對照實驗，．
（2）A酶切割后形成4段，所以有3個識別位點，B酶切割后形成3段，所以有2個切割位點．
（3）由表中酶切割后片段長度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以連接如圖所示．．
（4）圖中DNA兩片段經(jīng)酶切后共得到四個片斷，切割后形成的黏性末端相同，其中有二個片段組成了已知序列，則另一序列必為剩余的二個片段組成．DNA連接酶催化的是磷酸二酯鍵．
（5）圖中DNA兩片段經(jīng)酶切后共得到四個片斷，切割后形成的黏性末端相同，其中有二個片段組成了已知序列，則另一序列必為剩余的二個片段組成．DNA連接酶催化的是磷酸二酯鍵．
故答案為：
（1）對照（單一變量）
（2）3　2
（3）
（4）磷酸二酯
（5）啟動子　終止子

點評：本題考查基因工程，意在考查考生能從課外材料中獲取相關的生物學信息，并能運用這些信息，結合所學知識解決相關的生物學問題．