Question

15．在某些深海魚中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因A控制合成的抗凍蛋白A有較好的應用價值，通過轉基因技術獲得抗寒能力提高的植株．回答有關問題：
（1）從深海魚提取和純化DNA時，選擇NaCl溶液的合適濃度，利用DNA和其它雜質在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，達到分離目的，加入一定量可以進一步獲得含雜質較少的DNA．
（2）構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生黏性末端，也可能產生末端．若要在限制酶切割目的基因和質粒后使其直接進行連接，則應選擇能使二者產生黏性末端的限制酶．
（3）為了檢測A基因轉錄的mRNA是否翻譯成抗凍蛋白A，需從轉基因生物提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原抗體雜交．
（4）若要用動物細胞工程技術，制備抗A抗體的雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞按一定比例加入試管中，再加入誘導細胞融合．細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%．

Answer 1

分析 基因工程的操作步驟為：
第一步：目的基因的獲取
（1）目的基因是指：編碼蛋白質的結構基因．
（2）原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉錄法和化學合成法．
（3）PCR技術擴增目的基因
第二步：基因表達載體的構建
（1）目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用．
（2）組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因
第三步：將目的基因導入受體細胞
（1）轉化的概念：是目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程．
（2）常用的轉化方法：
將目的基因導入植物細胞：采用最多的方法是農桿菌轉化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等．
將目的基因導入動物細胞：最常用的方法是顯微注射技術．此方法的受體細胞多是受精卵．
將目的基因導入微生物細胞：Ca²⁺轉化法．
（3）重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據(jù)是標記基因是否表達．
第四步：目的基因的檢測和表達
（1）首先要檢測轉基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術．
（2）其次還要檢測目的基因是否轉錄出mRNA，方法是用標記的目的基因作探針與mRNA雜交．
（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質，方法是從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原--抗體雜交．
（4）有時還需進行個體生物學水平的鑒定．如轉基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀．

解答 解：（1）利用DNA和其它雜質在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，達到分離DNA的目的，根據(jù)DNA在冷酒精中凝集效果最佳，可以進一步獲得含雜質較少的DNA．
（2）構建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產生粘性末端或平末端，用同一種限制酶切割后產生的末端相同，可以直接相連．
（3）檢測基因工程中目的基因表達產物，可以提取蛋白質，進行抗原抗體雜交．
（4）制備抗A抗體的雜交瘤細胞，應該用免疫的小鼠B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，一般用滅活的密病毒做誘導劑．由于細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%，所以融合的細胞除了雜交瘤細胞外，還可能有B淋巴細胞相互融合形成的細胞，骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞．
故答案為：
（1）溶解度不同 冷卻酒精
（2）平  相同 
（3）蛋白質  抗原抗體雜交
（4）聚乙二醇（PEG、滅活的病毒）     B淋巴細胞相互融合形成的細胞，骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞   細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%

點評 此題較簡單，要求學生對基因工程四個步驟中每個步驟中具體細節(jié)要進行充分的記憶．同時還要求學生學會讀題、審題，并分析解題的能力，難度中等．