Question

15．如圖是利用羊來生產(chǎn)人抗凝血酶（AT）的基本流程．圖中amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，如tet^R表示四環(huán)素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ為三種限制酶及酶切位點．據(jù)圖回答問題：

（1）通過逆轉(zhuǎn)錄人工合成的AT基因無（填“有”或“無”）內(nèi)含子，可采用PCR（多聚酶鏈式反應(yīng)）技術(shù)來擴增獲得的AT基因．
（2）圖中將人AT基因插入到質(zhì)粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同時切割載體和含AT基因的片段，篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（3）重組質(zhì)粒上啟動子的功能是驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄．過程①可采用顯微注射的方法將重組質(zhì)粒導入羊受精卵中，羊的早期胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚階段后通過過程②移植到代孕羊體內(nèi)．
（4）可采用抗原一抗體雜交技術(shù)從分子水平來檢測AT基因是否表達成功．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）真核生物基因的編碼區(qū)包含外顯子和內(nèi)含子，但是翻譯的模板mRNA只是由外顯子轉(zhuǎn)錄而來，因此通過逆轉(zhuǎn)錄人工合成的AT基因沒有內(nèi)含子，可采用PCR（多聚酶鏈式反應(yīng)）技術(shù)來擴增獲得的AT基因．
（2）由于質(zhì)粒中只含有兩種限制酶切點，因此圖中將人AT基因插入到質(zhì)粒前，需要用HindⅢ和BamHI限制酶同時切割載體和含AT基因的片段；質(zhì)粒中氨芐青霉素抗性基因作為標記基因，用于檢測目的基因是否導入受體細胞，因此篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌首先需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行．
（3）重組質(zhì)粒上啟動子的功能是驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄．過程①可采用顯微注射的方法將重組質(zhì)粒導入羊受精卵中，羊的早期胚胎發(fā)育至桑椹胚或囊胚階段后通過過程②移植到代孕羊體內(nèi)．
（4）可采用抗原一抗體雜交技術(shù)從分子水平來檢測AT基因是否表達成功．
故答案為：
（1）無      PCR（多聚酶鏈式反應(yīng)）
（2）HindⅢ和BamH I        氨芐青霉素
（3）驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄     顯微注射      桑椹胚或囊胚
（4）抗原一抗體雜交

點評 本題難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的要求，著重考查了基因工程的步驟、目的基因?qū)�入動物細胞的方法等相關(guān)知識，要求考生具有一定的識圖能力，并能識記相關(guān)基礎(chǔ)知識．