Question

血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O₂和部分CO₂的運(yùn)輸。請(qǐng)根據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問(wèn)題。

（1）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為________，B為________。凝膠色譜法的基本原理是根據(jù)________而達(dá)到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除________，洗滌次數(shù)過(guò)少，無(wú)法除去；離心速度過(guò)高和時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使____________一同沉淀。達(dá)不到分離的效果。洗滌干凈的標(biāo)志是________________。釋放血紅蛋白的過(guò)程中起作用的試劑是________________。

（3）在B過(guò)程中加入物質(zhì)的量濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是__________________________________________________________________。如果紅色區(qū)帶________________，說(shuō)明色譜柱制作成功

Answer 1

（1）血紅蛋白的釋放 樣品的加入和洗脫 相對(duì)分子質(zhì)量的大小

（2）雜蛋白（血漿蛋白） 白細(xì)胞（等） 離心后上清液中沒(méi)有黃色 蒸餾水和甲苯

（3）模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境（保持體外pH和體內(nèi)一致保持蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)維持洗脫所需的壓力等合理答案均可）均勻一致的移動(dòng)

蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定。樣品處理包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放和分離血紅蛋白溶液；通過(guò)透析對(duì)血紅蛋白溶液進(jìn)行粗分離，透析的原理是透析袋能使小分子自由進(jìn)出而大分子則保留在袋內(nèi)，從而除去分子量較小的雜質(zhì)；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量魘雜質(zhì)蛋白除去，從而對(duì)樣品進(jìn)一步純合，最后SDS—聚丙烯酰凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。在B過(guò)程中加入物質(zhì)的量濃度為20m mol/L的磷酸緩沖液(pH為7.0)的目的是模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境（保持體外pH和體內(nèi)一致、保持蛋白質(zhì)的正常結(jié)構(gòu)、維持洗脫所需的壓力等合理答案均可）；如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)
，說(shuō)明色譜柱制作成功。