Question

【題目】枇杷食用、藥用價(jià)值高，但不耐儲(chǔ)存和運(yùn)輸�？蒲腥藛T以枇杷為原料，通過(guò)篩選優(yōu)良釀酒酵母，制備枇杷果酒，實(shí)驗(yàn)步驟如下。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）步驟1：將枇杷果皮和果園土壤勻漿放入三角瓶中，適度稀釋后放入YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，28℃搖床培養(yǎng)24小時(shí)。推測(cè)該步驟的主要目的是_____________。

（2）步驟2：將培養(yǎng)好的菌液稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-65個(gè)梯度，每個(gè)梯度至少設(shè)計(jì)_________個(gè)重復(fù)，用________法將0.1ml稀釋液接種到TTC平板培養(yǎng)基上，28℃_________（填“靜置”或“搖床”）培養(yǎng)2天。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)稀釋梯度為10-5的平板上平均有40個(gè)單菌落，由此可計(jì)算出每毫升菌液有________個(gè)微生物。其中有產(chǎn)酒精能力的酵母在TTC平板上顯紅色，從用途上來(lái)看TTC平板屬于________培養(yǎng)基。

（3）步驟3：將篩選出的釀酒酵母經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，分別接種到等量的枇杷汁中，密閉培養(yǎng)，每隔2h觀(guān)察各菌株的___________，篩選出發(fā)酵能力強(qiáng)的釀酒酵母。還可根據(jù)乙醇與______________試劑反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色，來(lái)檢驗(yàn)酒精的產(chǎn)生。

Answer 1

【答案】增加釀酒酵母的數(shù)量 3 涂布平板 靜置 4×107 鑒別 產(chǎn)氣量 酸性重鉻酸鉀

【解析】

1、微生物常見(jiàn)的接種的方法

①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。

②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。

2、培養(yǎng)基按照用途分類(lèi)包括基本培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。

（1）依據(jù)題干信息，“將枇杷果皮和果園土壤放入YPD液體培養(yǎng)基培養(yǎng)”可知，進(jìn)行選擇培養(yǎng)和液體培養(yǎng)目的是增加釀酒酵母的數(shù)量。

（2）進(jìn)行酵母菌菌落計(jì)數(shù)采用的接種方法是稀釋涂布平板，此方法遵循平行重復(fù)原則，一般將每個(gè)梯度設(shè)置至少3個(gè)重復(fù)，涂布后平板要倒置靜置培養(yǎng)。根據(jù)稀釋梯度為10-5的平板上平均有40個(gè)單菌落，由此可計(jì)算出每毫升菌液有40÷0.1×105=4×107個(gè)微生物。根據(jù)酵母菌在在平板上的顏色鑒定有產(chǎn)酒能力的酵母，可知TTC平板屬于從功能上分類(lèi)屬于鑒別培養(yǎng)基。

（3）酵母菌無(wú)氧呼吸會(huì)產(chǎn)生酒精和二氧化碳，因此可觀(guān)察菌株的產(chǎn)氣量來(lái)篩選出發(fā)酵能力強(qiáng)的釀酒酵母。酒精的鑒定可用酸性的重鉻酸鉀，顏色變化為橙色變?yōu)榛揖G色。