Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞�？蒲腥藛T利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的 。

（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到 期時(shí)， 可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。

（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有Rag2基因的表達(dá)載體。可以根據(jù)Rag2基因的 設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有 酶的酶切位點(diǎn)。

（4）為檢測(cè)Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的 ，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。

Answer 1

【答案】（1）細(xì)胞核 （2）囊胚 （3）核苷酸序列 HindⅢ和PstⅠ （4）蛋白質(zhì)

【解析】本題以胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)為背景，考查了核移植、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、基因工程相關(guān)知識(shí)。（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核。（2）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)位于囊胚中，所以重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期。（3）設(shè)計(jì)引物要遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，所以根據(jù)Rag2基因的核苷酸序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。Rag2基因基因是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割獲得，所以表達(dá)載體上應(yīng)具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點(diǎn)。（4）基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，所以提取小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原－抗體雜交。