Question

【題目】病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移是現(xiàn)在基因治療研究的最新方向，美、法等國成功采用腺病毒載體進(jìn)行心、腦、肺、肝內(nèi)膽管和肌肉組織的體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移．其具體思路如圖所示：

回答下列問題：
（1）如果要在短時間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用技術(shù)，在操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是 ．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時需要用到的工具酶有 ．
（3）作為接受轉(zhuǎn)移基因的體細(xì)胞應(yīng)具有的特點是（寫出一點即可）．在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時需用酶處理，使之分散成單個細(xì)胞，培養(yǎng)液中還需通人無菌氣體，其中通入CO2的目的主要是 ．
（4）如果檢測發(fā)現(xiàn)目的基因被成功導(dǎo)入了受體細(xì)胞，但卻沒有檢測到目的基因相對應(yīng)的蛋白質(zhì)，應(yīng)考慮位于目的基因首端的和末端的是否設(shè)計好，并從這方面進(jìn)一步改善．

Answer 1

【答案】
（1）PCR；使引物和模板鏈結(jié)合
（2）限制酶和DNA連接酶
（3）具有增殖優(yōu)勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理）；胰蛋白；維持培養(yǎng)液的PH
（4）啟動子；終止子
【解析】解：（1）如果要在短時間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術(shù)，第一次升溫是使雙鏈解開，即高溫解鏈；降溫的目的是使引物和模板鏈結(jié)合，即低溫復(fù)性；第二次升溫是使DNA復(fù)制開始進(jìn)行．（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．（3）作為接受轉(zhuǎn)移基因的體細(xì)胞應(yīng)具有的特點是 具有增殖優(yōu)勢；生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理等．在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時，當(dāng)細(xì)胞貼滿瓶壁時需用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細(xì)胞，培養(yǎng)液中還需通人無菌氣體，其中通入CO2的目的主要是維持培養(yǎng)液的PH．（4）基因表達(dá)載體包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因，啟動子位于目的基因的首端，啟動基因的轉(zhuǎn)錄，終止子位于目的基因的末端，終止轉(zhuǎn)錄過程．
所以答案是：（1）PCR 使引物和模板鏈結(jié)合（2）限制酶和DNA連接酶（3）具有增殖優(yōu)勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理） 胰蛋白 維持培養(yǎng)液的PH（4）啟動子 終止子
【考點精析】解答此題的關(guān)鍵在于理解基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．