Question

【題目】為獲得更好的療效，科學(xué)家運(yùn)用基因工程技術(shù)對抗體進(jìn)行改造，制備人鼠嵌合抗體，如圖1所示。嵌合抗體具體制備過程如圖2所示。據(jù)圖表回答下列問題：

　　　　　表1　引物對序列表

引物對A	P1　AAGCCGGGCGCGCCCGGAA P2　TTCGGCCCGCGTTATGCGCG
引物對B	S1　GTCCGCTAGTGGCTGTG S2　AGCTGGCGTTTAGCCTCG

(1)步驟①構(gòu)建表達(dá)載體時，在目的基因上游插入啟動子后，目的基因才有可能表達(dá)，據(jù)此推測獲取目的基因最可能的方法是____________；表達(dá)載體所具備的結(jié)構(gòu)有________。

(2)為了擴(kuò)增出大量目的基因需要用到PCR技術(shù)。常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、退火、延伸等步驟，退火的目的是________________________。設(shè)計引物是PCR技術(shù)的關(guān)鍵步驟之一，某同學(xué)設(shè)計的兩組引物如表1所示，請問哪一組(引物對A、引物對B)設(shè)計不合理，并說出不合理的理由________________________________________________。

(3)步驟②將重組載體通過共轉(zhuǎn)染導(dǎo)入骨髓瘤細(xì)胞的方法是________，骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)時，培養(yǎng)溫度和氣體條件為________。

(4)相對體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞捉取分裂嵌合抗體，從老鼠腹水中抽取得到嵌合單抗的優(yōu)點(diǎn)是________。

(5)若通過上述方法未得到嵌合單抗，請分析原因___________________________(至少答兩點(diǎn))。

Answer 1

【答案】 cDNA文庫法(逆轉(zhuǎn)錄法) 具有目的基因、標(biāo)記基因、復(fù)制原點(diǎn)、啟動子、終止子 引物與模板發(fā)生堿基互補(bǔ)配對 引物對A，引物P1自身堿基互補(bǔ)配對，引物P1和P2部分發(fā)生堿基互補(bǔ)配對 顯微注射 37 ℃、5%CO2 操作簡便 目的基因未成功導(dǎo)入　目的基因未正常表達(dá)

【解析】

(2)常規(guī)PCR技術(shù)一般包括變性、退火、延伸等步驟，其中退火的目的是使引物與模板發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，以便DNA鏈的延續(xù)。設(shè)計引物是PCR技術(shù)的關(guān)鍵步驟之一，引物對A在退火時會發(fā)生引物P1自身堿基互補(bǔ)配對或者引物P1和P2部分發(fā)生堿基互補(bǔ)配對，而失去與模板鏈結(jié)合的機(jī)會，其設(shè)計是不合理的。

(3)步驟②將重組載體通過共轉(zhuǎn)染導(dǎo)入骨髓瘤細(xì)胞的方法是顯微注射法，動物細(xì)胞培養(yǎng)所需的溫度和氣體條件為37 ℃、5%CO2。

(4)相對體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞捉取分裂嵌合抗體，從老鼠腹水中抽取得到嵌合單抗的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便。

(5)若通過上述方法未得到嵌合單抗，可能原因有：目的基因?yàn)閷?dǎo)入骨髓瘤細(xì)胞；導(dǎo)入的目的基因未能正確表達(dá)；表達(dá)的肽鏈未能正確拼接。