Question

【題目】我國一科研團隊將小麥液泡膜Na+/K+逆向轉運蛋白基因（TaNHX2基因）轉移到水稻細胞內，獲得了轉基因耐鹽水稻新品種。圖1是獲取的含有目的基因的DNA片斷，Sau3AI、EcoRI、BamHI為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點；圖2是土壤農桿菌中用于攜帶目的基因的Ti質粒結構示意圖。請分析回答：

（l）據圖分析可知，要構建基因表達載體，需要用________限制酶對DNA片段和質粒進行切割，再用____連接。

（2）為了獲得更多的目的基因用于實驗研究，可以用小麥葉肉細胞的基因組為模板，利用TaNHX，基因的特異引物，通過________方法進行擴增，該方法用到的酶是____。

（3）常用農桿菌轉化法將耐鹽基因導入水稻細胞。先將耐鹽基因插入Ti質粒的_________中，然后導入農桿菌中，再通過農桿菌侵染水稻細胞，將耐鹽基因插入水稻細胞的_________上，最后通過植物細胞工程中的____技術獲得轉基因植株，從而使其遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。

（4）為了檢測實驗成果，科研工作者在個體水平的檢測方法是____。

Answer 1

【答案】EcoRI DNA連接酶 PCR Taq酶（或耐高溫的DNA聚合酶） T-DNA 染色體DNA 植物組織培養(yǎng) 將轉基因水稻種植在鹽堿地上或用一定濃度的鹽水澆灌觀察結果

【解析】

基因工程技術的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）如圖所示，用EcoRI酶切可獲得目的基因，同時質粒上也具有EcoRI酶切位點，因此可用EcoRI限制酶對DNA片段和質粒進行切割，再用DNA連接酶將兩個片段連接起來。

（2）在體外可用PCR擴增技術對目的基因進行擴增，PCR用的酶是耐熱的Taq酶。

（3）在利用農桿菌轉化法將目的基因導入水稻細胞（植物細胞）時，應該將耐鹽基因插入Ti質粒的T-DNA上，經過轉化作用進入水稻細胞，并將其插入水稻細胞染色體的DNA上，最后通過植物細胞工程中的植物組織培養(yǎng)技術獲得轉基因植株，從而使其遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達。

（4）耐鹽目的基因在個體水平上的檢測方法是：將轉基因水稻種植在鹽堿地上或用一定濃度的鹽水澆灌觀察結果。