3、植物細胞工程的基本技術：植物組織培養(yǎng)技術，植物體細雜交技術。

2、植物細胞工程的理論基礎：植物細胞的全能性。

1、細胞工程：指應用細胞生物學和分子生物學的原理和方法，通過細胞水平或細胞器水平上的操作，按照人的意愿來改變細胞內的遺傳物質或獲得細胞產品的一門綜合科學技術。

15．（1）一定的流動性 （2）SARS病毒感染后產生的效應B細胞,單克隆抗體+抗癌

藥物（3）造血干細胞 細胞分化（4）有絲　加倍　龍膽紫 （5）無限增值,產生單

一抗體

課后練習

1D　2C　3D　4C　5B　6B　7A　8D　9D　10A　11D　12B　13C　14D　15D　16C　17A　18ACD　19ABC　20BD  21BCD

22（1）纖維素酶(或果膠酶)（2）rrHH、RRhh（3）置大于800勒克斯光照下培養(yǎng)，收集分化的細胞團 （4）細胞的全能性 II （5）抗體與抗原結合，發(fā)揮特異性免疫效應  （6）非典患者　2；（7）液體　動物血清

23（1）每種效應B細胞只能產生一種特異性抗體  　瘤細胞能無限增殖 

（2）動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)　�。�3）雜交瘤

（4）抗體是蛋白質，若口服則被消化，使抗體失去其功能　�。�5）體液    效應

24（1）不能  因為沒有將抗原注入小鼠體內，無法獲得產生此種抗體的效應B細胞  （2）細胞融合  滅活的病毒（或聚乙二醇）  雙親細胞的遺傳物質  特異性抗體  在體外培養(yǎng)條件下大量繁殖  （3）培養(yǎng)液  小鼠腹水  （4）制備單克隆抗體

25(1)獲得能產生相應抗體的B淋巴細胞(2)既能無限增殖，又能產生特定抗體(3)動物細胞融合  動物細胞培養(yǎng)  滅活病毒  (4)動物血清(5)胰蛋白酶  (6)雜交瘤細胞  能產生特定抗體的雜交瘤細胞(7)方法：培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞　　原理：加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖

26（1）相互接觸  接觸抑制  單層（或一層）     胰蛋白酶 （2）衰老甚至死亡   不死性  降低減少 （3）由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入活細胞內，故活細胞不能著色（或由于死細胞的膜喪失了選擇透過性，大分子染料能夠進入死細胞內而著色） （4）中  （5）冷凍（或超低溫、液氮）  酶    新陳代謝

（6）抗原

27 I．有毒物質會使動物細胞發(fā)生染色體變異    Ⅲ．(2)①分別放人等量的細胞懸浮液    ③把3個培養(yǎng)瓶放在37℃(或適宜溫度)的恒溫箱中培養(yǎng)    (3)②加1～2滴龍膽紫溶液染色    (4)有絲分裂中小白鼠正常細胞有絲分裂中期高倍顯微照片   Ⅳ．(1)甲、乙兩種化學物質均有毒性．且乙的毒性比甲的毒性大  (2)對照動物細胞在正常培養(yǎng)狀態(tài)下染色體變異頻率非常低

28⑴葉綠體   ⑵纖維素酶和果膠酶   ⑶病毒   聚乙二醇（振蕩、離心、生物、化學因素等）  ⑷無菌、無毒的環(huán)境    營養(yǎng)   溫度和pH    氣體環(huán)境   ⑸組織培養(yǎng)中用到的培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)成分，有利于培養(yǎng)物的生長，然而各種雜菌同樣也可以在上面迅速生長，所以組織培養(yǎng)過程中污染現(xiàn)象經常發(fā)生。培養(yǎng)基一旦被污染，迅速生長的各種雜菌不但會和培養(yǎng)物爭奪營養(yǎng)，而且這些雜菌生長的過程中會生成大量對培養(yǎng)物有害的物質，導致培養(yǎng)物迅速死亡（2分）     ⑹由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，通常加入血清、血漿等一些天然成分   ⑺動物細胞培養(yǎng)     ⑻無   因為胚胎在母體子宮中完成胚胎發(fā)育               

14．（1）纖維素酶和果膠酶    細胞壁  　離心、振動、電激  產生新的細胞壁   （2）植物組織培養(yǎng)    （3）幼齡動物的組織或器官或胚胎   胰蛋白酶    滅活的病毒誘導    雜種細胞    流動性    （4）抗原   效應B細胞、記憶細胞、抗體   骨髓瘤細胞    （5）3   雜交瘤細胞   用特定選擇培養(yǎng)基   小鼠腹腔內增殖

　解析：單克隆抗體的制備是利用了雜交瘤細胞具有既能迅速大量繁殖，又能產生專一抗體的特點，單克隆抗體的制備包括誘導骨髓瘤細胞與經免疫的B淋巴細胞融合，經過多次篩選獲得能產生特定抗體的雜交瘤細胞，經體外或體內細胞培養(yǎng)，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲得單克隆抗體，其中重要的技術手段包括動物細胞融合、動物細胞培養(yǎng)等。

 ①                               

②在體外大量繁殖      產生特異性抗體

③動物細胞融合      動物細胞培養(yǎng)

課堂練習

1B　2D　3A　4B　5B　6D　7A　8B　9B　10D　11D　　12BCD　13ABCD

答案

例1：

解析：植物原生質體融合或動物細胞融合均需誘導，誘導方法可以是電刺激等物理方法，聚乙二醇處理等化學方法，動物細胞還常用滅活的病毒誘導融合。去除植物細胞的細胞壁常用纖維素酶和果膠酶，將動物組織分散成單個細胞常用胰蛋白酶。小鼠骨髓瘤細胞和經抗原免疫小鼠的B淋巴細胞融合形成的雜交瘤細胞的主要用途是制備單克隆抗體。某種植物（如：染色體數(shù)目為2N），甲乙兩品種的體細胞雜種的染色體數(shù)目是兩品種體細胞染色體數(shù)之和（4N），甲乙兩品種雜交后代的染色體數(shù)目不改變（2N）。  選D

例2：

28、自然界中有一種含有葉綠體的原生動物―眼蟲，這說明植物的細胞器同樣可以在某些動物細胞中存活。某同學提出問題“動物細胞與植物細胞之間可以實現(xiàn)雜交嗎？”他嘗試設計出下列具體的實驗方案。結合實驗方案回答：

實驗原理：根據(jù)眼蟲的特點，動物細胞和植物細胞之間在理論上是可以實現(xiàn)雜交的。實驗步驟如下：

（1）①中選的植物材料細胞中，必須有的細胞器是            。

（2）③過程所用的酶是            和                 

（3）④過程除了用電激之外，還可以用         、    　　　  等做誘導因素。

（4）⑤過程動物細胞體外培養(yǎng)需要滿足的條件是      、       、     、     。

（5）在整個實驗過程中，要強調所用的器械的滅菌和實驗人員的無菌操作，原因是          

                                                                       。

（6）在⑤⑥過程中，通常要添加血清，原因是                                。

（7）如果讓動植物雜交種批量培養(yǎng)生產，可以用           技術。

（8）動植物雜交種細胞是否有細胞壁？       。理由是                       。

（1）經研究人員實驗得知，A、B、C三個培養(yǎng)瓶的Q值依次為：QA=1.3%，QB=12.5%，QC=0.1%，由此可知該實驗的結論是                                         。

（2）在實驗中，C培養(yǎng)瓶起                         作用，C瓶的Q值說明         

                                                                       。　　

27、現(xiàn)有甲、乙兩種可能有一定毒性的化學物質，實驗室研究人員欲通過動物細胞培養(yǎng)的方法來鑒定它們是否有毒性并比較二者毒性的強弱。請你以一個研究人員的身份參與此項研究，完成下列有關問題。   

 Ⅰ．實驗原理：                                                    

根據(jù)這種變異細胞占全部培養(yǎng)細胞的百分數(shù)(以下稱Q值)，可判斷該化學物質的毒性。

 Ⅱ．材料用具：活的小白鼠胚胎、胰蛋白酶液、動物細胞培養(yǎng)液、動物細胞固定液、適宜濃度的龍膽紫溶液、適宜濃度的化學物質甲溶液、適宜濃度的化學物質乙溶液、蒸餾水、滴管、培養(yǎng)皿、剪刀、錐形瓶、恒溫箱、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、小白鼠正常有絲分裂各時期的高倍顯微照片。

 Ⅲ．實驗步驟：

 (1)制備細胞懸浮液。

把活的小白鼠胚胎放在培養(yǎng)皿中剪碎，轉入錐形瓶中，加入胰蛋白酶液處理，使胚胎組織離散成單個細胞，再加入動物細胞培養(yǎng)液，制成細胞懸浮液。

 (2)進行細胞培養(yǎng)。

①取A、B、C 3個潔凈的培養(yǎng)瓶，                        ；

②A、B兩個培養(yǎng)瓶中分別加入等量的甲、乙溶液。C瓶中加入等量的蒸餾水，搖勻；

③                                                        

(3)制作臨時裝片。

①當細胞增殖到大約8代左右時，同時從恒溫箱中取出3個培養(yǎng)瓶，用胰蛋白酶液處理，加入動物細胞固定液，迅速殺死細胞并固定細胞分裂相；

②靜置一段時間后，分別從各培養(yǎng)瓶底部吸取適量的細胞懸浮液，滴在與培養(yǎng)瓶有相同編號的載玻片的中央，                                    ，3min~5min后，蓋上蓋玻片。

（4）鏡檢和統(tǒng)計

把臨時裝片放在顯微鏡下，先用低倍鏡后用高倍鏡，尋找處于             期的細胞，并與                  進行對比，統(tǒng)計并計算該期變異的細胞占該期細胞總數(shù)的百分數(shù)(Q值)。

Ⅵ.結果分析與結論：