Question

以下是有關(guān)現(xiàn)代生物科技的兩個問題，請回答：
Ⅰ．動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是動物細胞工程的基礎(chǔ)，在動物細胞工程的其他技術(shù)中都得到廣泛應(yīng) 用，例如：提供供體細胞進行核移植；制備單克隆抗體等等．下面是與動物細胞工程有關(guān)的問 題，請分析回答：
（1）在進行動物細胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用

 

處理，以使其分散成單個細胞，制成細胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是

 

．
（3 ）應(yīng)用于核移植的供體細胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，原因是10代以后細胞可能發(fā)生

 

（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有

 

的特點．
Ⅱ轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程如下圖所示．圖中PstI、SmaI、EcoRI，ApaI等為限制酶，質(zhì)粒和抗病基因上的箭頭表示限制酶的切割位點．下圖表示四種限制酶的識別序列及酶切點．

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaL
識別序列及酶切位點

（1）若要獲得抗病基因，能否用限制酶SmaI對圖中對應(yīng)的位點進行切割？

 

．
要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒能否用PstI、ApaI限制酶切割質(zhì)粒？

 

．
（2）卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長，根據(jù)這一原理可以利用含卡3卩霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入重組質(zhì)粒的香蕉細胞．由此推斷重組質(zhì)粒中應(yīng)含有

 

基因，作為標(biāo)記基因．
（3）②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基？

 

．

Answer 1

考點：動物細胞與組織培養(yǎng)過程,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、動物細胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)．
2、動物細胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2．
3、分析題圖：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點，其中SmaⅠ酶的切割位點位于抗病基因（目的基因）上；質(zhì)粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位點．所以要活動重組質(zhì)粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ進行切割．①→②表示脫分化過程、②→③表示再分化過程、④是新植體．

解答： 解：Ⅰ．（1）在進行動物細胞培養(yǎng)時，首先要將動物組織剪碎，然后用胰蛋白酶處理，以使其分散成單個細胞，制成細胞懸液．
（2）氣體環(huán)境中CO₂的作用是維持培養(yǎng)液中的pH．
（3）應(yīng)用于核移植的供體細胞一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，原因是10代以后細胞可能發(fā)生遺傳物質(zhì)的突變（遺傳物質(zhì)的改變）．
（4）單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，具有特異性強、靈敏度高的特點．
Ⅱ．（1）因為限制酶SmaⅠ的切割位點位于抗病基因上，對SmaⅠ位點進行切割破壞了抗病基因的結(jié)構(gòu)，所以要獲得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ對圖中對應(yīng)的位點進行切割．要獲得含抗病基因的重組質(zhì)粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割質(zhì)粒，因為含有抗病基因的外源DNA分子上沒有ApaⅠ限制酶切割位點．
（2）欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時含有抗卡那霉素基因，作為標(biāo)記基因．
（3）決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過程中非常重要．②、③階段培養(yǎng)基中生長素與細胞分裂素的比值不同，因此這兩個階段不能是用同種培養(yǎng)基．
故答案為：
Ⅰ．（1）胰蛋白酶
（2）維持培養(yǎng)液中的pH
（3）遺傳物質(zhì)的突變（遺傳物質(zhì)的改變也可）
（4）特異性強、靈敏度高
Ⅱ．（1）不能        不能
（2）抗卡那霉素 
（3）不能

點評：本題考查了動物細胞培養(yǎng)技術(shù)，結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗病香蕉的培育過程圖考查了基因工程和植物組織培養(yǎng)技術(shù)的相關(guān)知識，意在考查考生的識圖能力和理解所學(xué)知識要點的能力；能運用所學(xué)知識與觀點，對某些生物學(xué)問題進行解釋、推理，做出合理的判斷或得出正確的結(jié)論．