Question

20．下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程及有關資料，請分析回答下列問題．資料1  巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，同時AOX1基因也會因受到誘導而表達．[5′AOX1和3′AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子]．
資料2  巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，所以科學家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達．
（1）如果要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，需要用到DNA連接酶處理．
（2）獲取HBsAg基因時，可利用從基因文庫獲取、人工合成、方法獲�。�
（3）構建的重組質(zhì)粒中有5′AOX1、3′AOX1（TT）和HBsAg基因外，還應有標記基因．
（4）步驟1中的方法是Ga²⁺處理，此時的大腸桿菌處于感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）狀態(tài)．
（5）為了確認巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應該加入卡拉霉素以便篩選，轉(zhuǎn)化后的細胞
中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子雜交方法進行檢測．
（6）與大腸桿菌等細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質(zhì)合
成后，細胞可以對其進行加工（修飾）并分泌到細胞外，便于提�。�

Answer 1

分析 分析題圖：圖中質(zhì)粒含有SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位點，其中SacI位于啟動子上，BglⅡ位于終止子上．要將HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割質(zhì)粒，要獲取含有5′AOX1--3′AOX1段基因，應選用限制酶BglⅡ來切割．5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡那霉素抗性基因，在培養(yǎng)基中加入卡那霉素以便篩選導入重組質(zhì)粒的目的菌．

解答 解：（1）獲取目的基因后，需要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組質(zhì)粒，并將其導入大腸桿菌以獲取大量重組質(zhì)粒．
（2）獲取目的基因時，可利用從基因文庫獲取、人工合成等方法獲�。�
（3）基因表達載體包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因．
（4）在目的基因?qū)�入細菌細胞�?nèi)時，需要用Ga²⁺處理，此時的大腸桿菌處于感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）狀態(tài)．
（5）轉(zhuǎn)化后的細胞中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子雜交方法進行檢測．
（6）細菌是原核生物，只含核糖體一種細胞器，而酵母菌是真核生物，除含有核糖體外，還含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細胞器．所以與細菌相比，用巴斯德畢赤酵母菌細胞作為基因工程的受體細胞，其優(yōu)點是在蛋白質(zhì)合成后，細胞可以對其進行加工（修飾）并分泌到細胞外，便于提�。�
故答案為：
（1）DNA連接酶
（2）從基因文庫獲取、人工合成
（3）標記基因
（4）Ga²⁺處理    感受態(tài)（易吸收外界DNA分子的狀態(tài)）
（5）DNA分子雜交
（6）加工（修飾）

點評 本題結合工程菌形成過程，考查基因工程的相關知識，意在考查考生分析題圖獲取有效信息的能力；理解所學知識要點，把握知識間聯(lián)系的能力；能運用所學知識解決生物學問題的能力和應用能力．