Question

回答有關(guān)基因工程的問題：
（1）基因工程的基本操作程序包括四個(gè)步驟．其中目的基因的獲取方法有從

 

中獲取、利用PCR技術(shù)

 

、通過

 

用化學(xué)方法直接人工合成；基因工程的核心是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，其目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因

 

；目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為

 

；檢查基因工程是否成功的關(guān)鍵步驟是

 

．
（2）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生

 

末端．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生

 

（相同、不同）黏性末端的限制酶．
（3）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，其作用是

 

．在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用

 

處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為

 

．為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成

 

，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
（4）將某目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是

 

，一般先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

上，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，并將目的基因插入植物細(xì)胞中的

 

上，使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達(dá)載體的構(gòu)建，③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，④目的基因的檢測與鑒定．
第一步：目的基因的獲取
原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成．人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法． 
第二步：基因表達(dá)載體的構(gòu)建
（1）目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用．
（2）組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因
第三步：將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞
轉(zhuǎn)化的概念：是目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程．
第四步：目的基因的檢測和表達(dá)
（1）首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術(shù)．
（2）其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交．
（3）最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原--抗體雜交．
（4）有時(shí)還需進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定．如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀．

解答： 解：（1）獲取目的基因可從基因文庫中獲取，可利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，可通過DNA合成儀人工發(fā)合成．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用．目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化．檢查基因工程是否成功的關(guān)鍵步驟是目的基因的檢測與鑒定．
（2）限制酶切割DNA可獲得黏性末端或平末端，同種限制酶切割可獲得相同的黏性末端．
（3）啟動(dòng)子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，作用是驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄（出mRNA）．目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞常用 Ca²⁺ 處理，使其成為感受態(tài)細(xì)胞．檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，方法是用標(biāo)記的目的基因作探針與mRNA雜交，檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原--抗體雜交．
（4）目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體上．
故答案為：
（1）基因文庫   擴(kuò)增    DNA合成儀   能夠表達(dá)和發(fā)揮作用  轉(zhuǎn)化  目的基因的檢測與鑒定
（2）平   相同
（3）驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄（出mRNA）   Ca²⁺ （DNA-RNA）分子雜交技術(shù)    蛋白質(zhì)
（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法   T-DNA     染色體的DNA

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程，理解基因工程的操作步驟是解題的關(guān)鍵，