Question

【題目】已知某細(xì)菌的兩種突變類型細(xì)菌Ⅰ和細(xì)菌Ⅱ的營養(yǎng)條件和菌落特征都相同，但細(xì)菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，細(xì)菌Ⅱ能分解有機物B而不能分解有機物A�，F(xiàn)有這兩種類型細(xì)菌的混合液樣品，要將其分離，有人設(shè)計了一種方案，部分操作步驟如圖。

（1）步驟一使用的是牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，其中含有細(xì)菌生長所需的水、_____等營養(yǎng)物質(zhì)（至少寫出3種）；該培養(yǎng)基是_____。

A．固體培養(yǎng)基 B．液體培養(yǎng)基 C．通用培養(yǎng)基 D．選擇培養(yǎng)基

（2）步驟一采用_____接種，此接種法可使接種細(xì)菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可能形成單個、獨立的_____，最終可能得到純種的細(xì)菌；步驟二各瓶中的培養(yǎng)基加入了A、B兩種有機物的目的是_____。

（3）無論是培養(yǎng)基（液），接種前除了要調(diào)節(jié)pH外，都必須對培養(yǎng)基進(jìn)行；接種時必須在超凈工作臺及酒精燈火焰附近操作，原因是_____。

（4）步驟三中，若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物含量進(jìn)行測定，預(yù)測可能的結(jié)果并推測結(jié)論：

①A與B兩種化合物含量都明顯下降，說明瓶中同時存在細(xì)菌Ⅰ和細(xì)菌Ⅱ，兩者未分離。

②_____。

③_____。

（5）經(jīng)步驟三后，若所有瓶中培養(yǎng)液的A、B化合物含量測定結(jié)果都如題中①的情況，則應(yīng)_____，再測定各瓶中A、B兩種化合物的含量，直到分別獲得每種類型細(xì)菌為止。

Answer 1

【答案】無機鹽、碳源、氮源 B、C、D 劃線法 菌落 篩選、分離兩種類型的細(xì)菌 防止雜菌污染 A含量明顯下降，而B含量幾乎未變，則得到細(xì)菌Ⅰ B含量明顯下降，而A含量幾乎未變，則得到細(xì)菌Ⅱ 重復(fù)步驟1和步驟2

【解析】

1．培養(yǎng)基的概念、種類及營養(yǎng)構(gòu)成
（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

（3）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。
2．無菌技術(shù)
（1）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。
（2）具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒。
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。
④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
3、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
4、接種方法：平板劃線法和稀釋涂布法。

（1）培養(yǎng)細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子等，該培養(yǎng)基是通用培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基或選擇培養(yǎng)基，故選BCD。

（2）由圖可知，步驟一采用平板劃線法接種，可使接種細(xì)菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可能形成單個、獨立的菌落，最終可能得到純種的細(xì)菌；步驟二各瓶中的培養(yǎng)基加入了A、B兩種有機物的目的是篩選、分離兩種類型的細(xì)菌。
（3）接種前除了要調(diào)節(jié)pH外，都必須對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌；接種時必須在超凈工作臺及酒精燈火焰附近操作，原因是防止雜菌污染。
（4）若對其中某瓶培養(yǎng)液中A、B兩種有機物含量進(jìn)行測定：若A與B兩種化合物含量都明顯下降，說明瓶中同時存在細(xì)菌Ⅰ和細(xì)菌Ⅱ，說明兩者未分離；若A含量明顯下降，而B含量幾乎未變，則得到細(xì)菌Ⅰ；若B含量明顯下降，而A含量幾乎未變，則得到細(xì)菌Ⅱ。
（5）經(jīng)步驟三后，若所有瓶中培養(yǎng)液的A、B化合物含量都下降，說明兩種細(xì)菌還未分開，則需要重復(fù)步驟一和步驟二，再測定各瓶中A、B兩種化合物的含量，直到分別獲得每種類型細(xì)菌為止。