Question

【題目】用基因工程技術生產羧酸酯酶(CarE)制劑的流程如圖所示�；卮鹣铝袉栴}:

(1)①過程所需的酶是_____。從cDNA文庫中獲取的目的基因______(填“有”或“無”)啟動子。實現②過程常用_____技術,該技術的前提是要有_______,以便合成引物。

(2)過程⑧將重組表達載體導入大腸桿菌時,首先用Ca2+處理大腸桿菌,目的是_____。然后將______溶于緩沖液中與該大腸桿菌混合,在一定溫度下完成轉化。

(3)過程④可利用________技術鑒定CarE基因是否已導入大腸桿菌。

Answer 1

【答案】逆轉錄酶 無 PCR 一段已知目的基因的核苷酸序列 使大腸桿菌處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài) 重組表達質粒 DNA分子雜交

【解析】

1、將某種生物體內的DNA全部提取出來，用適當的限制酶，將DNA切成一定范圍大小的DNA片段，然后，將這些DNA片段分別與載體連接起來，導入受體菌的群體中儲存，這個受體菌群體就叫做這種生物的基因組文庫。

2、如果用某種生物發(fā)育的某時期的mRNA反轉錄產生的多種互補DNA（也叫cDNA)片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，那么，這個受體菌群體就叫做這種生物的cDNA文庫。

3、目的基因檢測與鑒定

（1）檢測目的基因是否已導入受體細胞。常采用DNA分子雜交技術，即將轉基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯示出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。

（2）檢測目的基因是否轉錄出了mRNA。采用分子雜交技術，從轉基因生物中提取mRNA，用標記的目的基因作探針，與mRNA雜交，如果顯示出雜交帶，則表明目的基因轉錄出了mRNA。

（3）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。采用抗原—抗體雜交，即從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原一抗體雜交，若有雜交帶出現，表明目的基因已形成蛋白質。

(1)①過程以某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA為模板反轉錄產生的多種互補DNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群叫做這種生物的cDNA文庫。由于啟動子和終止子不能轉錄，故cDNA文庫中獲取的目的基因無啟動子。PCR技術（過程②）可在體外大量擴增目的基因，但前提是要一段有已知目的基因的核苷酸序列，以便合成引物。

(2)過程③將重組表達載體導入大腸桿菌時，首先用Ca2+處理細胞，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，這種細胞稱為感受態(tài)細胞。然后將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉化過程。

(3)鑒定CarE基因是否已導入大腸桿菌，常采用DNA分子雜交技術。